Name: Método rápido de microperlas magnéticas para la purificación eficiente de neutrófilos de baja densidad (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-11-11T14:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 14 s
Description: Aprende a aislar neutrófilos de baja densidad mediante centrifugación en gradiente de densidad y separación magnética con microperlas. Este método rápido proporciona células puras y viables para estudios inmunológicos.

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<table><tbody><tr><td>&nbsp; Anticuerpo policlonal anticitrulina en conejo</td><td>AbCam</td><td>ab100932</td><td>Dilución 1/50</td></tr><tr><td>Placa de cultivo tisular de 96 pozos</td><td>Coprotagonista; Corning, Inc.</td><td>3596</td><td></td></tr><tr><td>Anticuerpo IgG1 de ratón Alexa Fluor 488 antihumano CD11b</td><td>BioLegend</td><td>301317</td><td>0,25 & mu; g/mL</td></tr><tr><td>Anticuerpo IgM de ratón Alexa Fluor 647 antihumano CD66b</td><td>BioLegend</td><td>305109</td><td>0,05 & mu; g/mL</td></tr><tr><td>Anticuerpo anti-ratón IgG (H+L) contra la cabra, Alexa Fluor 488</td><td>Invitrogen - Thermo Fisher Scientific</td><td>A-11001</td><td>Dilución 1/50</td></tr><tr><td>Anticuerpo monoclonal IgG1 de ratón contra elastasa de neutrófilos</td><td>Santa Cruz Biotecnología</td><td>SC-55549</td><td>10 & micro; g/mL</td></tr><tr><td>Anticuerpo de burro anti-IgG de conejo (H+L), Alexa Fluor 555</td><td>Invitrogen - Thermo Fisher Scientific</td><td>A-31572</td><td>Dilución 1/50</td></tr><tr><td>Anticuerpo IgG1 antihumano CD62L de ratón APC</td><td>BioLegend</td><td>304809</td><td>0,03 & mu; g/mL</td></tr><tr><td>Anticuerpo IgG1 de ratón antihumano CD14 APC/Cianine7</td><td>BioLegend</td><td>367107</td><td>0,25 & mu; g/mL</td></tr><tr><td>Attune NxT flow cytometer&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific, Inc.</td><td>(láseres azules/rojos)</td><td></td></tr><tr><td>Albúmina sérica bovina (BSA) Fracción V</td><td>MP Biomedicina</td><td>810025</td><td></td></tr><tr><td>Anticuerpo IgG1 de ratón Brilliant Violet 510 antihumano CD33</td><td>BioLegend</td><td>366609</td><td>0,30 & mu; g/mL</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Calbiochem/EMD Millipore</td><td>268298</td><td></td></tr><tr><td>Dextran T500</td><td>Farmacosmos A/C</td><td>5.51005E+11</td><td></td></tr><tr><td>Dihidrorodamina-123</td><td>Anaspec, Inc.</td><td>AS-85711</td><td></td></tr><tr><td>Clasificador de celdas FACS</td><td>Becton Dickinson&nbsp;</td><td>Modelo FACSAria</td><td></td></tr><tr><td>Suero fetal bovino (FBS)</td><td>Gibco</td><td>16000-044</td><td></td></tr><tr><td>Ficoll-Paque</td><td>Merck KG</td><td>GE 17-1440-03</td><td></td></tr><tr><td>Anticuerpo IgG1 del ratón anti-humano CD98 del ratón FITC</td><td>BioLegend</td><td>315603</td><td>0,30 & mu; g/mL</td></tr><tr><td>FlowJo Software</td><td>Becton Dickinson</td><td>Versión 10, 2019</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio invertido de fluorescencia</td><td>Olimpo</td><td>Modelo IX-70</td><td></td></tr><tr><td>Heparina</td><td>Inhepar - PiSA Farmaceutica</td><td>3660149</td><td>5000 UI/mL</td></tr><tr><td>Hepes</td><td>Sigma Aldrich</td><td>H7006</td><td></td></tr><tr><td>Microperlas de quimerismo CD66b de MACSprep</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-111-552</td><td></td></tr><tr><td>Imán</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-102</td><td></td></tr><tr><td>Columna de separación magnética</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-201</td><td></td></tr><tr><td>Microcentrífuga</td><td>Eppendorf</td><td>Modelo 5415C</td><td></td></tr><tr><td>Lector de microplacas</td><td>BioTek Instruments</td><td>Sinergia de modelos HT</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehído</td><td>Sigma Aldrich</td><td>158127</td><td></td></tr><tr><td>Anticuerpo IgG1 de ratón anti-PE en el ratón CD10</td><td>BioLegend</td><td>312203</td><td>0,05 & mu; g/mL</td></tr><tr><td>Anticuerpo IgG2a de ratón anti-PE</td><td>BD Pharmingen</td><td>550868</td><td>Dilución 1/40</td></tr><tr><td>Anticuerpo IgG1 de ratón antihumano CD15 PE/Cianano5</td><td>BioLegend</td><td>323013</td><td>0,25 & mu; g/mL</td></tr><tr><td>Phorbol 12-miristato 13-acetato (PMA)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P8139</td><td></td></tr><tr><td>poli-L-lisina</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P2658</td><td></td></tr><tr><td>Centrífuga refrigerada</td><td>Eppendorf</td><td>Modelo 5702R</td><td></td></tr><tr><td>Medio de cultivo tisular RPMI-1640</td><td>Gibco</td><td>23400-021</td><td></td></tr><tr><td>SYTOX Green</td><td>Molecular Probes, Inc.</td><td>S-7020</td><td></td></tr><tr><td>Preadolescente-20 y nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P2287</td><td></td></tr><tr><td>Vectashield</td><td>Laboratorios Vector</td><td>H-1000</td><td></td></tr></tbody></table>

método rápido de microperlas magnéticas para la purificación eficiente de neutrófilos de baja densidad

Rapid Magnetic-microbead Method for Efficient Purification of Low-density Neutrophils

Los neutrófilos de baja densidad (LDN) en individuos sanos representan alrededor del 5% de la PBMC (Figura 2A). El protocolo descrito aquí suele ofrecer LDN pura (&gt; 90%). Las células también se recuperan de manera eficiente (rendimiento de alrededor del 98%) con alta viabilidad (&gt; 95%; Figura 2B). A modo de comparación, las LDN también se purificaron mediante clasificación de células activadas por fluorescencia como se desc...

Método rápido de microperlas magnéticas para la purificación eficiente de neutrófilos de baja densidad

Neutrophils, important leukocytes of innate immunity, have traditionally been considered a homogeneous cell population. Nevertheless, recent evidence has ...

rapid-magnetic-microbead-method-for-efficient-purification-low

Research

Investigación

JoVE Journal

Immunology and Infection

Inmunología e Infección

Los neutrófilos se encuentran entre las primeras células en llegar al sitio de la respuesta inmune inflamatoria, y sus funciones y mecanismos han sido ampliamente estudiados in vitro. Se demuestra un gradiente de densidad estándar método de separación para aislar los neutrófilos humanos de sangre entera utilizando los medios disponibles en el mercado de separación.

Aislamiento de neutrófilos Protocolo

El video explica una forma de purificar las células B mediante la orientación inmunomagnética y la separación de la suspensión de células mononucleares de sangre periférica. El método consiste en etiquetar tipos de células no deseadas con anticuerpos o ligandos específicos (unidos a partículas magnéticas) dirigidos a proteínas específicas de la superficie celular, para ser agotadas de la suspensión celular heterogénea por separación magnética.

Selección inmunomagnética negativa: un método para purificar células B a partir de células mononucleares de sangre periférica

En este video, describimos el procedimiento para aislar neutrófilos de baja densidad, o LDN, del líquido de lavado peritoneal de un paciente humano postoperatorio. Las LDN así obtenidas se pueden utilizar en experimentos posteriores para comprender su papel en el crecimiento y la progresión del tumor.

Aislamiento peritoneal de neutrófilos de baja densidad: una técnica para obtener neutrófilos de baja densidad a partir de líquido de lavado peritoneal mediante la clasificación de células activadas magnéticamente

Se describe un protocolo para el aislamiento y purificación de los neutrófilos de médula ósea de ratón por centrifugación en gradiente de densidad y para el etiquetado de neutrófilos usando colorantes CellTracker. Esto representa un método sencillo, rápido, reproducible y económico para la obtención de un gran número de neutrófilos para los estudios funcionales aguas abajo o experimentos de transferencia adoptivos y seguimiento.

Aislamiento, Purificación y Etiquetado de neutrófilos de médula ósea de ratón de Estudios funcionales y experimentos de transferencia adoptivos

Los neutrófilos desempeñan un papel importante no solo en la defensa del huésped contra los microorganismos invasores, sino que también están implicados en la vigilancia inmunitaria de las células tumorales. En este trabajo describimos técnicas relacionadas con el aislamiento de neutrófilos con propiedades antitumorales y métodos para monitorizar la función de neutrófilos antitumorales in vitro e in vivo.

Aislamiento y caracterización de los neutrófilos con propiedades antitumorales

Los neutrófilos son el tipo más abundante de glóbulos blancos. Aquí se describe el aislamiento de neutrófilos de la sangre humana mediante el método de separación en gradiente de densidad y la diferenciación de células promielocíticas humanas (HL60) a lo largo de la vía granulocítica; para probar su papel en la sensibilidad de las células de linfoma a los agentes antilinfomas.

Aislamiento de neutrófilos y análisis para determinar su papel en el linfoma de células sensibles a los agentes terapéuticos

Las mutaciones en el gen de la quinasa 2 de la leucina rica causan la enfermedad de Parkinson hereditaria. Hemos desarrollado un método fácil y robusto para evaluar la fosforilación controlada por LRRK2 de Rab10 en neutrófilos de sangre periférica humana. Esto puede ayudar a identificar a las personas con aumento de la actividad de la vía de la quinasa LRRK2.

Aislamiento de Neutrófilos de Sangre Periférica Humana para Interrogar la Vía de Kinasa LRRK2 Asociada al Parkinson mediante la evaluación de la fosforilación de Rab10

Este protocolo detalla un método para el aislamiento de neutrófilos de sangre total, capas buffy o membranas de leucoféresis, logrando un buen rendimiento, alta pureza y mínima activación celular. Utilizamos la purificación por gradiente, la sedimentación de glóbulos rojos (RBC) y la lisis de RBC para obtener una preparación de neutrófilos de alta calidad / pureza.

Aislamiento de neutrófilos humanos de sangre entera y buffy coats

Esta investigación describe dos técnicas para aislar abundantes trampas extracelulares de neutrófilos (TNE) de la médula ósea de rata. Un método combina un kit comercial de aislamiento de neutrófilos con centrifugación en gradiente de densidad, mientras que el otro emplea solo centrifugación en gradiente de densidad. Ambos enfoques producen TNE funcionales que superan a los de los neutrófilos de sangre periférica.

Enfoque único para aislar neutrófilos de médula ósea de rata con capacidad comparable

Este protocolo detalla un método compatible con la automatización de alto rendimiento para aislar células mononucleares de sangre periférica humana para biobancos y otros fines.

Aislamiento de células mononucleares de sangre periférica humana de Buffy Coats a través de la separación inmunomagnética de perlas de alto rendimiento

Aquí, proporcionamos un enfoque confiable para aislar neutrófilos de densidad baja y normal de la sangre total utilizando aislamiento magnético (selección negativa) y medio de gradiente de densidad discontinuo. Garantiza el aislamiento intacto de las células de alta pureza (≥93%), lo que facilita el análisis preciso de las subpoblaciones de neutrófilos, crucial para comprender sus funciones en la salud y la enfermedad.

Aislamiento y caracterización de neutrófilos de densidad baja y normal a partir de sangre total

Aprende a aislar neutrófilos de baja densidad mediante centrifugación en gradiente de densidad y separación magnética con microperlas. Este método rápido proporciona células puras y viables para estudios inmunológicos.

Método rápido de microperlas magnéticas para la purificación eficiente de neutrófilos de baja densidad

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