Name: Una técnica rápida para la visualización en vivo de las células de levadura inmovilizada (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2006-11-09T00:00:00.000+00:00
Duration: 2 min 54 s
Description: Aprende una técnica rápida para visualizar células de levadura inmovilizadas mediante bloques de agar y medios líquidos. Este método permite observar cambios epigenéticos durante la división celular en experimentos de corto y largo plazo.

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Nos gustaría dar las gracias a Pete Houston y Xu Eugenia por toda su ayuda.

<ol><li> Células inmovilizadas para la microscopía de epifluorescencia curso. Tenga en cuenta que este protocolo sólo es útil si las lentes del objetivo del microscopio están por debajo de la platina del microscopio. </li><li> Células de lugar a la concentración deseada en medios líquidos en un cubreobjetos de largo (aproximadamente 24x50mm) </li><li> Corte un bloque de agar con el tamaño deseado de una placa de medio sintético (éstas tienen un menor autofluorescencia) y el lugar en las células. Coloque el lado del bloque de agar no se manejan por pinzas en contacto con las células. </li><li> Para los cursos de tiempo más corto (hasta 3 horas), esta configuración es suficiente. Si las células se mueven cuando se visualiza en el microscopio, disminuir el volumen de las células o aumento de área del bloque de agar. </li><li> Para los cursos de tiempo más largo, se coloca una gota de agua dulce de medios líquidos en la parte superior del bloque de agar, y colocar una lámina de vidrio en la parte superior del bloque de agar. En esta diapositiva se reduce la evaporación a través de la parte superior del bloque de agar. Si lo desea, los bordes del bloque de agar en contacto con la hoja de la cubierta se pueden sellar con vaselina para reducir aún más la humedad. He utilizado esta configuración para películas de hasta 9 horas de duración, con la células que se dividen en las tasas de tipo salvaje. </li></ol>

<ol>
	<li>Xu, E. Y., Zawadzki, K. A., Broach, J. R. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+observations+reveal+intermediate+transcriptional+silencing+states.">Single-cell observations reveal intermediate transcriptional silencing states.</a> Mol. Cell. 23, 219-229 (2006).</li></ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

Esta es una técnica rápida que inmoviliza a las células de levadura al tiempo que permite el crecimiento. Hemos seguido el crecimiento de levadura para un máximo de diez horas, con la levadura salvaje mostrando tasas de la división de tipo durante todo el experimento. Tenga en cuenta que esta configuración requiere que la lente del objetivo por debajo de la platina del microscopio.

una técnica rápida para la visualización en vivo de las células de levadura inmovilizada

A Rapid Technique for the Visualization of Live Immobilized Yeast Cells

Presentamos aquí una técnica sencilla, rápida y extremadamente flexible para la inmovilización y la visualización de las células de levadura crece por microscopía de epifluorescencia. La técnica es ideal para la visualización de las poblaciones de levadura estática, o experimentos de los cursos de tiempo de hasta diez horas de duración. Mi microscopio investiga la herencia epigenética en los loci de apareamiento en silencio en S. cerevisiae. Hay dos loci de apareamiento en silencio, HML y HMR, que normalmente no se expresan como están empaquetadas en heterocromatina. En el silencio de fondo SIR1 mutante se ha debilitado de tal manera que cada lugar puede ser en el estado expresados ​​o silenciados epigenética, por lo que en la población en su conjunto hay una mezcla de células de los diferentes estados epigenéticos, tanto para HML y HMR. Mi microscopio demostró que no hay relación entre el estado epigenético de HML y HMR en una celda individual. SIR1 células estocásticamente cambiar estados epigenéticos, el establecimiento de silenciar a un lugar previamente expresada o expresar un lugar antes silenciadas. Mi evolución en el tiempo un seguimiento de microscopía individuales SIR1 las células y su descendencia para anotar la frecuencia de cada uno de los cuatro interruptores epigenéticos es posible, y por lo tanto la estabilidad de cada uno de los estados epigenéticos en las células SIR1. Véase también Xu et al., Mol. Celular 2006.

Una técnica rápida para la visualización de crecimiento de las células de levadura inmovilizada, aquí se aplica a los reporteros fluorescentes en el silencio de apareamiento loci HML y HMR

Una técnica rápida para la visualización en vivo de las células de levadura inmovilizada

Presentamos aquí una técnica sencilla, rápida y extremadamente flexible para la inmovilización y visualización de células de levadura en crecimiento mediante epifluorescencia...

El objetivo del experimento consiste en poder seguir una población de células donadoras sir una bajo el microscopio para observar cómo cambian los estados epigenéticos y con qué frecuencia varían dichos estados epigénicos tras cada división sucesiva de las células. Tome una laminilla alargada, coloque alrededor de siete microlitros de células sobre la laminilla alargada y utilice un plato de medio sintético. Tome una cuchilla de afeitar y realice cortes en el agar. A continuación, tome un bloque de agar, levántelo y colóquelo sobre las células.Vale, para experimentos a corto plazo, hasta tres horas. Esto por sí solo está bien. Para experimentos a largo plazo, inmovilizaré las células; añado medio líquido encima del cojín de agar y luego coloco una lámina de vidrio sobre todo el conjunto.El medio actuará como un sello entre los dos. El portaobjetos tiene únicamente la función de evitar la evaporación desde la parte superior del bloque de agar. Con este montaje, el bloque de agar permanecerá húmedo y las células continuarán dividiéndose durante hasta ocho, al menos ocho horas.

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Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

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Aprende una técnica rápida para visualizar células de levadura inmovilizadas mediante bloques de agar y medios líquidos. Este método permite observar cambios epigenéticos durante la división celular en experimentos de corto y largo plazo.

Una técnica rápida para la visualización en vivo de las células de levadura inmovilizada

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