Name: Una técnica rápida para la visualización en vivo de las células de levadura inmovilizada (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2006-11-09T00:00:00.000+00:00
Duration: 2 min 54 s
Description: Aprende una técnica rápida para visualizar células de levadura inmovilizadas mediante bloques de agar y medios líquidos. Este método permite observar cambios epigenéticos durante la división celular en experimentos de corto y largo plazo.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Nos gustaría dar las gracias a Pete Houston y Xu Eugenia por toda su ayuda.

<ol><li> Células inmovilizadas para la microscopía de epifluorescencia curso. Tenga en cuenta que este protocolo sólo es útil si las lentes del objetivo del microscopio están por debajo de la platina del microscopio. </li><li> Células de lugar a la concentración deseada en medios líquidos en un cubreobjetos de largo (aproximadamente 24x50mm) </li><li> Corte un bloque de agar con el tamaño deseado de una placa de medio sintético (éstas tienen un menor autofluorescencia) y el lugar en las células. Coloque el lado del bloque de agar no se manejan por pinzas en contacto con las células. </li><li> Para los cursos de tiempo más corto (hasta 3 horas), esta configuración es suficiente. Si las células se mueven cuando se visualiza en el microscopio, disminuir el volumen de las células o aumento de área del bloque de agar. </li><li> Para los cursos de tiempo más largo, se coloca una gota de agua dulce de medios líquidos en la parte superior del bloque de agar, y colocar una lámina de vidrio en la parte superior del bloque de agar. En esta diapositiva se reduce la evaporación a través de la parte superior del bloque de agar. Si lo desea, los bordes del bloque de agar en contacto con la hoja de la cubierta se pueden sellar con vaselina para reducir aún más la humedad. He utilizado esta configuración para películas de hasta 9 horas de duración, con la células que se dividen en las tasas de tipo salvaje. </li></ol>

<ol>
	<li>Xu, E. Y., Zawadzki, K. A., Broach, J. R. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+observations+reveal+intermediate+transcriptional+silencing+states.">Single-cell observations reveal intermediate transcriptional silencing states.</a> Mol. Cell. 23, 219-229 (2006).</li></ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

Esta es una técnica rápida que inmoviliza a las células de levadura al tiempo que permite el crecimiento. Hemos seguido el crecimiento de levadura para un máximo de diez horas, con la levadura salvaje mostrando tasas de la división de tipo durante todo el experimento. Tenga en cuenta que esta configuración requiere que la lente del objetivo por debajo de la platina del microscopio.

una técnica rápida para la visualización en vivo de las células de levadura inmovilizada

A Rapid Technique for the Visualization of Live Immobilized Yeast Cells

Presentamos aquí una técnica sencilla, rápida y extremadamente flexible para la inmovilización y la visualización de las células de levadura crece por microscopía de epifluorescencia. La técnica es ideal para la visualización de las poblaciones de levadura estática, o experimentos de los cursos de tiempo de hasta diez horas de duración. Mi microscopio investiga la herencia epigenética en los loci de apareamiento en silencio en S. cerevisiae. Hay dos loci de apareamiento en silencio, HML y HMR, que normalmente no se expresan como están empaquetadas en heterocromatina. En el silencio de fondo SIR1 mutante se ha debilitado de tal manera que cada lugar puede ser en el estado expresados ​​o silenciados epigenética, por lo que en la población en su conjunto hay una mezcla de células de los diferentes estados epigenéticos, tanto para HML y HMR. Mi microscopio demostró que no hay relación entre el estado epigenético de HML y HMR en una celda individual. SIR1 células estocásticamente cambiar estados epigenéticos, el establecimiento de silenciar a un lugar previamente expresada o expresar un lugar antes silenciadas. Mi evolución en el tiempo un seguimiento de microscopía individuales SIR1 las células y su descendencia para anotar la frecuencia de cada uno de los cuatro interruptores epigenéticos es posible, y por lo tanto la estabilidad de cada uno de los estados epigenéticos en las células SIR1. Véase también Xu et al., Mol. Celular 2006.

Una técnica rápida para la visualización de crecimiento de las células de levadura inmovilizada, aquí se aplica a los reporteros fluorescentes en el silencio de apareamiento loci HML y HMR

Una técnica rápida para la visualización en vivo de las células de levadura inmovilizada

Presentamos aquí una técnica sencilla, rápida y extremadamente flexible para la inmovilización y visualización de células de levadura en crecimiento mediante epifluorescencia...

El objetivo del experimento consiste en poder seguir una población de células donadoras sir una bajo el microscopio para observar cómo cambian los estados epigenéticos y con qué frecuencia varían dichos estados epigénicos tras cada división sucesiva de las células. Tome una laminilla alargada, coloque alrededor de siete microlitros de células sobre la laminilla alargada y utilice un plato de medio sintético. Tome una cuchilla de afeitar y realice cortes en el agar. A continuación, tome un bloque de agar, levántelo y colóquelo sobre las células.Vale, para experimentos a corto plazo, hasta tres horas. Esto por sí solo está bien. Para experimentos a largo plazo, inmovilizaré las células; añado medio líquido encima del cojín de agar y luego coloco una lámina de vidrio sobre todo el conjunto.El medio actuará como un sello entre los dos. El portaobjetos tiene únicamente la función de evitar la evaporación desde la parte superior del bloque de agar. Con este montaje, el bloque de agar permanecerá húmedo y las células continuarán dividiéndose durante hasta ocho, al menos ocho horas.

a-rapid-technique-for-visualization-live-immobilized-yeast

Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

Deleción del gen y la sobreexpresión de la proteína son métodos comunes para el estudio de las funciones de las proteínas. En este artículo se describe un protocolo para el análisis del fenotipo de desarrollo en función de la concentración de proteínas en la población y de una sola célula en los...

Análisis de la elaboración de un fenotipo morfológico en función de la concentración de proteínas en la levadura en ciernes

Un método para la incorporación de colonias de levadura que permite el corte de luz y microscopía electrónica. Este protocolo permite la determinación de la distribución de células y las células esporuladas pseudohyphal dentro de las colonias de proporcionar una nueva herramienta en la comprensión de la organización de los tipos de células dentro de una comunidad de hongos.

Colonia de levaduras Método de anidamiento

Un enfoque sólido para controlar la entrega de los orgánulos de la luz del ácido de la vacuola de levadura para la degradación y el reciclaje se describe. El método se basa en el etiquetado específico de los orgánulos de destino con una codificada genéticamente doble emisión de fluorescencia de pH biosensor, y la visualización de las células individuales mediante microscopía de fluorescencia.

Un ensayo de microscopía de fluorescencia para Mitophagy Vigilancia de la levadura Saccharomyces cerevisiae

Cuantitativa de células vivas por fluorescencia microscopia análisis de la levadura de fisión

Se presenta un protocolo sencillo para obtener películas de microscopía de fluorescencia de las células de levadura en crecimiento, y un paquete de software basado en GUI para extraer los datos de series de tiempo de una sola célula. El análisis incluye linaje automático y la asignación por división de tiempo integrado con inspección visual y manual de conservación de los datos de seguimiento.

La adquisición de fluorescencia Time-lapse películas de levadura en ciernes y el análisis de la dinámica de una sola célula con injertos

Se presenta un método para la dispersión superficial de los cromosomas a partir de levaduras en ciernes. Este método se deriva de un método descrito previamente por Loidl y Klein. Además, demostramos un procedimiento para la inmunotinción de cromosomas diseminados.

Difusión de superficies y inmunotinción de cromosomas de la levadura

Proporcionamos un método básico reproducible para la microscopía a largo plazo del ciclo de vida sexual de la levadura de fisión. Con los pequeños ajustes descritos, el protocolo presentado permite que la investigación se centre en diferentes etapas del proceso reproductivo.

Microscopía de la levadura de fisión del ciclo de vida sexual

Este protocolo describe el análisis de compartimentos intracelulares etiquetados fluorescentemente en levaduras en ciernes utilizando microscopía confocal 4D (time-lapse 3D) multicolor. Los parámetros de imagen se eligen para capturar señales adecuadas mientras se limitan los fotodaños. Los plugins Personalizados ImageJ permiten rastrear y analizar cuantitativamente las estructuras etiquetadas.

Microscopía 4D de levadura

Aquí, presentamos imágenes de células vivas que es un método de microscopía no tóxico que permite a los investigadores estudiar el comportamiento de las proteínas y la dinámica nuclear en las células de levadura de fisión viva durante la mitosis y la meiosis.

Examen de la dinámica nuclear de levadura de ficción mitotica y meiótica por microscopía de células vivas de fluorescencia

Los colorantes fluorescentes vitales son herramientas esenciales para el análisis de imágenes de células vivas en la biología moderna de células fúngicas. Este artículo detalla la aplicación de colorantes fluorescentes establecidos y menos conocidos para el seguimiento de la dinámica de la membrana plasmática, la endo-/exócicosis y la morfogénesis de la pared celular en hongos filamentosos.

Aplicación de colorantes fluorescentes selectivos de membrana y pared celular para imágenes de células vivas de hongos filamentosos

Aprende una técnica rápida para visualizar células de levadura inmovilizadas mediante bloques de agar y medios líquidos. Este método permite observar cambios epigenéticos durante la división celular en experimentos de corto y largo plazo.

Una técnica rápida para la visualización en vivo de las células de levadura inmovilizada

Explorar más videos