Name: Contraste de fase y de interferencia diferencial microscopía de contraste (DIC) (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-08-06T17:41:00.000+00:00
Duration: 6 min 49 s
Description: Aprende a utilizar microscopía de contraste de fase y DIC para visualizar especímenes biológicos transparentes. Estas técnicas mejoran la resolución de estructuras celulares en investigación biomédica.

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Varios clips de vídeo que demuestra contraste de fases y microscopía DIC fueron tomadas de otro video-artículo, titulado <a href="details.stp?ID=197">Las capas de la simbiosis</a> . JoVe graciosamente reconoce la contribución hecha por el laboratorio de Leadbetter.

El protocolo de texto completo de este enfoque experimental está disponible en <a href="http://www.mrw.interscience.wiley.com/emrw/9780471143031/cp/cpcb/article/cb0401/current/abstract ">protocolos actuales en Biología Celular.</a>

Los autores no tienen nada que revelar.

contraste de fase y de interferencia diferencial microscopía de contraste (dic)

Phase Contrast and Differential Interference Contrast (DIC) Microscopy

De contraste de fase microscopio se utiliza a menudo para producir contraste transparente, no absorbe la luz, las muestras biológicas. La técnica fue descubierta por Zernike, en 1942, quien recibió el premio Nobel por sus logros. Microscopía DIC, introducido a finales de 1960, ha sido muy popular en la investigación biomédica, ya que pone de relieve los bordes de los detalles estructurales muestra, ofrece una alta resolución de secciones ópticas de las muestras de espesor incluyendo células de los tejidos, huevos y embriones y no sufre de la típica fase de halos de imágenes de contraste de fase. Este protocolo se destacan los principios y las aplicaciones prácticas de estas técnicas de microscopía.

Este protocolo se destacan los principios y las aplicaciones prácticas de la fase y el contraste de interferencia diferencial (DIC) de Microscopía

Contraste de fase y de interferencia diferencial microscopía de contraste (DIC)

La microscopía de contraste de fases se utiliza frecuentemente para generar contraste en especímenes biológicos transparentes que no absorben la luz. La técnica fue descubierta por ...

La microscopía óptica es una de las herramientas, si no la más importante, en el campo de la investigación biomédica. Dependiendo de la aplicación, son deseables diferentes modos de iluminación para la observación de muestras. Este video demostrará dos modos ópticos de iluminación con luz transmitida: contraste de fase y microscopía DIC o de contraste por interferencia diferencial.Hola, soy Victoria San Frolic del servicio central de Imagen Óptica del Centro de Ciencias de la Salud de la Universidad de Texas en San Antonio. Hoy les mostraré cómo observar adecuadamente especímenes utilizando microscopía de contraste de fase y contraste de interferencia diferencial. Comencemos.La microscopía de campo brillante estándar no es adecuada para observar especímenes transparentes y incoloros. La microscopía de contraste de fase se utiliza a menudo para generar contraste en especímenes biológicos transparentes que no absorben la luz. La técnica fue descubierta por Zurich en 1942, quien recibió el Premio Nobel por su logro.El microscopio de contraste de fases es un microscopio óptico de campo claro al que se le han añadido objetivos especiales de contraste de fases, que contienen una placa o anillo de fase, y un anillo condensador en lugar de un diafragma. El anillo suele ubicarse en la torreta del condensador, y su tamaño debe seleccionarse según el objetivo utilizado. Tras configurar la iluminación de Köhler, seleccione el objetivo de fase adecuado y luego gire el anillo de fase correspondiente para colocarlo en posición en el condensador.Una vez que el anillo de fase del objetivo y el anillo del condensador se han alineado correctamente para ser concéntricos y superpuestos, podemos observar la muestra y ajustar adecuadamente el enfoque. Así que vamos a demostrar cómo se ve el contraste de fases a través del microscopio. Aquí se muestra un corte de hígado de rata.Bajo contraste de fases. Este método mejora la apariencia del material biológico al cambiar el contraste de diferentes tonos de gris a tonos que van del negro al blanco. Sin embargo, notará que los especímenes están rodeados por un halo, que oscurece la estructura fina.Este halo es un artefacto de la iluminación mediante el anillo de fase. Ahora notará que cuando cambiamos a campo claro, este espécimen es muy difícil de observar. Al volver al contraste de fase, podemos ver claramente la estructura y la forma de las células en el tejido hepático de rata desde su introducción a finales de la década de 1960.La microscopía de contraste de interferencia diferencial o DIC ha sido popular en la investigación biomédica porque produce imágenes de alta resolución de estructuras finas al realzar las interfaces con contraste, y la imagen obtenida corresponde a una sección óptica muy delgada. De hecho, la capacidad de DIC para producir secciones ópticas lo ha convertido en un modo útil de iluminación con luz transmitida para la microscopía confocal. El microscopio DIC es un microscopio óptico de campo claro al que se le añaden los siguientes elementos: un polarizador colocado entre la fuente de luz y el condensador.Un prisma divisor de haz DIC en el condensador, un prisma combinador de haz DIC justo detrás del objetivo y un analizador en el espacio de infinito antes de los dos haces. Para obtener el mejor rendimiento de la óptica DIC, es importante primero alinear el microscopio de luz para iluminación Köhler y luego colocar los elementos DIC en la trayectoria óptica. La luz procedente de la fuente atraviesa un polarizador y luego se divide mediante el primer prisma.Estos haces emparejados viajan cercanos entre sí. Si ambos haces pasan a través del mismo material en la muestra, entonces, cuando se recombinan mediante el segundo prisma, no interfieren entre sí y, por lo tanto, aparecen grises. Sin embargo, en un borde de una estructura, uno de los haces del par atraviesa un material diferente al de su pareja y se altera.Cuando estos haces se recombinan mediante el segundo prisma, interferirán ya sea constructivamente produciendo un punto brillante o destructivamente produciendo un punto oscuro. A continuación, observe diatomeas con contraste DIC. Notará que los detalles finos de la estructura de las diatomeas son fácilmente visibles.Sin embargo, si se eliminan los componentes ópticos de contraste de interferencia diferencial (DIC), estos detalles desaparecen. El contraste a través del espécimen es brillante en un lado y más oscuro en el otro. Esto da la impresión de una topografía, pero de hecho, se trata de una ilusión.La dirección del efecto de sombra proyectada puede invertirse girando el polarizador a través de un punto de cruce hasta el contraste opuesto. Acabamos de revisar los modos ópticos de contraste de fase y DIC. Solo para recordarle, la eliminación de contraste de fase mejora los especímenes con contraste desde tonos negros hasta blancos y es útil para observar especímenes que son incoloros y transparentes.DIC también genera contraste en la muestra. Lo hace creando una imagen de alta resolución de una sección óptica delgada. Eso es todo.Gracias por ver el video y mucha suerte con su microscopía.

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Biología

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Aprende a utilizar microscopía de contraste de fase y DIC para visualizar especímenes biológicos transparentes. Estas técnicas mejoran la resolución de estructuras celulares en investigación biomédica.

Contraste de fase y de interferencia diferencial microscopía de contraste (DIC)

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