Le montage de gélose : une méthode de base pour monter des embryons de poisson-zèbre vivants pour l’imagerie à long terme

0 views • 3:34 min • April 30th, 2023

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- Commencez par ajouter de l’agarose E3 à point de fusion moyen à bas et chauffez jusqu’à ce que l’agarose se dissolve complètement. Refroidissez l’agarose à 37 degrés Celsius et ajoutez la solution de tricaïne. Ensuite, anesthésez les embryons en ajoutant de la tricaïne dans une boîte de Pétri contenant des embryons dans un milieu E3. Faites tourner la boîte de Pétri pour recueillir les embryons au milieu.

À l’aide d’une pipette de transfert, prélevez un embryon avec une quantité minimale de milieu. Tenez la pipette en position verticale et faites rebondir l’embryon pour le positionner à l’extrémité de la pipette. Placez maintenant l’embryon dans la solution d’agarose sans ajouter de milieu en excès, ce qui diluerait l’agarose et empêcherait la gélification. Mélangez délicatement l’embryon dans l’agarose et transférez la solution dans le puits d’une plaque d’imagerie à l’aide de la pipette.

Placez la plaque sous un microscope et utilisez la pointe d’une pipette pour positionner l’embryon dans l’orientation souhaitée. Une fois que l’agarose se solidifie, versez un milieu E3 contenant de la tricaïne dessus pour garder la gélose hydratée et imager l’embryon. Dans un exemple de protocole, nous monterons des embryons de poisson-zèbre parabiotique pour l’imagerie et l’analyse.

Pour obtenir des images des embryons fusionnés, préparez de l’agarose à 0,8 % à bas point de fusion. Alors qu’il est encore chaud, aliquote un millilitre d’agarose dans des tubes microfuges de 1,5 millilitre placés dans un bloc chauffant à 37 degrés Celsius. Anesthésez les embryons parabiotiques en ajoutant 1 millilitre de 4 milligrammes par millilitre de tricaïne de pH 7,0 aux 25 millilitres de milieu E3 contenant les embryons. Tournez doucement le plat pour que les embryons s’accumulent au milieu.

Ensuite, à l’aide d’une pipette de transfert en plastique à pointe large, aspirez les embryons dans le moins de liquide possible. Ensuite, tournez la pipette à la verticale et faites rebondir doucement les embryons pour qu’ils se déposent tout au fond de la pipette. Transférez ensuite les embryons dans une aliquote de 1 millilitre d’agarose à bas point de fusion en touchant légèrement la pointe de la pipette sur la surface de l’agarose. Jetez tout excès de liquide de la pipette et utilisez la pipette pour mélanger délicatement les embryons dans l’agarose.

Ensuite, à l’aide de la pipette, transférez l’agarose et les embryons dans le puits d’une plaque à six puits à fond de verre. Sous un stéréomicroscope, utilisez une pointe de chargement de gel fixée à l’extrémité d’une aiguille de taquinerie pour positionner les embryons près du verre de protection et dans l’orientation souhaitée pour l’imagerie. Une fois que l’agarose a pris et qu’un milieu contenant de la tricaïne a été ajouté aux puits, utilisez un microscope confocal à balayage laser à épifluorescence à champ large inversé ou un microscope confocal à disque rotatif pour acquérir des images.

Pour un champ de vision de l’embryon entier, utilisez un subjectif 4x. Utilisez un objectif 20x pour imager un tissu spécifique. Traitez les images selon le protocole texte.

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Last updated: 4 July 2026