Pourquoi l'anesthésie est-elle importante pour l'imagerie longitudinale ?

L'anesthésie avec la tricaïne minimise les mouvements embryonnaires pendant les séances d'imagerie prolongées, réduisant le flou de mouvement et améliorant la clarté du signal dans les acquisitions en lapse de temps.

Comment l'agarose à bas point de fusion soutient-elle la viabilité de l'embryon ?

L'agarose à bas point de fusion se solidifie à des températures physiologiques, fournissant une matrice hydratée et inerte qui maintient la position de l'embryon sans toxicité ni perturbation du développement.

Qu'est-ce qui permet une orientation constante de l'embryon dans le puits ?

Un positionnement précis à l’aide d’une pipette et d’une pointe de chargement pour gel sous microscopie stéréo permet un placement contrôlé de l’embryon par rapport à la lame pour une imagerie standardisée.

Pourquoi la réplication est-elle importante lors du montage des embryons ?

La réplication assure une cohérence positionnelle et environnementale entre les puits, réduisant ainsi la variabilité technique et permettant des comparaisons fiables entre les groupes expérimentaux.

Quels paramètres d'imagerie sont essentiels avant l'acquisition ?

Le choix de l'objectif (par exemple, 4x pour l'embryon entier, 20x pour une spécificité tissulaire) et la composition du milieu contenant la tricaïne doivent être optimisés afin d'équilibrer la pénétration, la résolution et la santé de l'embryon pendant l'acquisition d'images.

Le montage de gélose : une méthode de base pour monter des embryons de poisson-zèbre vivants pour l’imagerie à long terme

JoVE Encyclopedia of Experiments

Biologie

0 vues • 3:34 min • April 30th, 2023

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

- Commencez par ajouter de l’agarose E3 à point de fusion moyen à bas et chauffez jusqu’à ce que l’agarose se dissolve complètement. Refroidissez l’agarose à 37 degrés Celsius et ajoutez la solution de tricaïne. Ensuite, anesthésez les embryons en ajoutant de la tricaïne dans une boîte de Pétri contenant des embryons dans un milieu E3. Faites tourner la boîte de Pétri pour recueillir les embryons au milieu.

À l’aide d’une pipette de transfert, prélevez un embryon avec une quantité minimale de milieu. Tenez la pipette en position verticale et faites rebondir l’embryon pour le positionner à l’extrémité de la pipette. Placez maintenant l’embryon dans la solution d’agarose sans ajouter de milieu en excès, ce qui diluerait l’agarose et empêcherait la gélification. Mélangez délicatement l’embryon dans l’agarose et transférez la solution dans le puits d’une plaque d’imagerie à l’aide de la pipette.

Placez la plaque sous un microscope et utilisez la pointe d’une pipette pour positionner l’embryon dans l’orientation souhaitée. Une fois que l’agarose se solidifie, versez un milieu E3 contenant de la tricaïne dessus pour garder la gélose hydratée et imager l’embryon. Dans un exemple de protocole, nous monterons des embryons de poisson-zèbre parabiotique pour l’imagerie et l’analyse.

Pour obtenir des images des embryons fusionnés, préparez de l’agarose à 0,8 % à bas point de fusion. Alors qu’il est encore chaud, aliquote un millilitre d’agarose dans des tubes microfuges de 1,5 millilitre placés dans un bloc chauffant à 37 degrés Celsius. Anesthésez les embryons parabiotiques en ajoutant 1 millilitre de 4 milligrammes par millilitre de tricaïne de pH 7,0 aux 25 millilitres de milieu E3 contenant les embryons. Tournez doucement le plat pour que les embryons s’accumulent au milieu.

Ensuite, à l’aide d’une pipette de transfert en plastique à pointe large, aspirez les embryons dans le moins de liquide possible. Ensuite, tournez la pipette à la verticale et faites rebondir doucement les embryons pour qu’ils se déposent tout au fond de la pipette. Transférez ensuite les embryons dans une aliquote de 1 millilitre d’agarose à bas point de fusion en touchant légèrement la pointe de la pipette sur la surface de l’agarose. Jetez tout excès de liquide de la pipette et utilisez la pipette pour mélanger délicatement les embryons dans l’agarose.

Vidéos connexes

0 Vues

Dernière mise à jour : 15 août 2026

Le montage de gélose : une méthode de base pour monter des embryons de poisson-zèbre vivants pour l’imagerie à long terme

Aperçu

Composantes clés de l'étude

Domaine scientifique

Contexte

Objectif de l'étude

Méthodes utilisées

Résultats principaux

Conclusions

Questions fréquemment posées

Pertinence industrielle pour les cadres

Applications stratégiques en recherche et développement biopharmaceutique

Découverte précoce et validation de cibles

Élaboration de tests et criblage

Recherche translationnelle et préclinique

Intégration du pipeline et du flux de travail

Impact opérationnel et organisationnel

Considérations relatives à la mise en œuvre

F.A.Q. sur la bio-industrie pharmaceutique

L'imagerie non invasive de la candidose disséminée chez les larves poisson zèbre

Haute Résolution Mont entier In Situ Hybridation dans les embryons de poisson zèbre pour étudier l'expression des gènes et la fonction

Imagerie en direct des récepteurs de chimiokine dans les neutrophiles du poisson-zèbre pendant les réponses des plaies

En direct l'imagerie du cerveau de poisson zèbre embryonnaires par microscopie confocale

L'étiquetage et l'imagerie des cellules dans le cerveau postérieur Zebrafish

Préparation d’échantillons de microscopie à feuillet de lumière : montage d’embryons de poisson-zèbre vivants pour l’imagerie à long terme

Montage de gélose en couches : préparation d’embryons de poisson-zèbre vivants pour l’imagerie à long terme avec un microscope inversé

Dissection et montage latéral embryons de poisson zèbre: Analyse de la moelle épinière développement

Multicouche de montage pour à long terme Fiche microscopie optique de poisson zèbre

Imagerie Structures subcellulaires dans le Embryo Living Zebrafish