Séparation des bactéries par quantité de capsule à l’aide d’un gradient de densité discontinu

Commencez avec un tube contenant un gradient de densité discontinu prédéfini, préparé à l’aide de particules de silice colloïdale non toxiques enrobées de polyvinylpyrrolidone.

Le dégradé comprend trois couches non superposées, disposées par ordre croissant de densités de haut en bas.

Prenez une banque de mutants de transposons bactériens, une suspension groupée de souches bactériennes avec des mutations aléatoires induites par des transposons.

Un sous-ensemble de ces mutations perturbe les gènes qui régulent la capsule, une couche de polysaccharides entourant la paroi cellulaire bactérienne, ce qui donne des souches avec des quantités variables de capsules.

Ajoutez la bibliothèque bactérienne en haut du dégradé très lentement, sans mélanger l’interface.

Centrifugez le tube à une vitesse modérée.

Le gradient facilite la migration différentielle des bactéries en fonction de la quantité de leurs capsules.

Les souches hyper-capsulées, moins denses en raison de leur couche de polysaccharides hydratée, se localisent près du sommet.

Les souches faiblement capsulées s’installent au milieu, et les souches non capsulées et plus denses migrent vers le bas.

Les souches bactériennes séparées sont prête