Préparation et transformation de bactéries par électroporation à haute tension

Commencez avec un tube contenant des bactéries inoculées dans un milieu nutritif.

Incuber en secouant jusqu’à ce que les cellules atteignent la phase de division active.

Centrifuger pour collecter les cellules et jeter le surnageant.

Lavez à plusieurs reprises les cellules avec du glycérol glacé pour éliminer les sels et remettez-les en suspension dans le glycérol pour maintenir la viabilité cellulaire.

Préparez un plasmide contenant un gène de résistance aux antibiotiques dans de l’eau stérile avec de l’EDTA pour empêcher la dégradation de l’ADN.

Mélangez la solution plasmidique avec les cellules bactériennes.

Appliquez une courte impulsion à haute tension pour créer temporairement des pores dans la membrane bactérienne.

Cela permet à l’ADN plasmidique de pénétrer dans le cytoplasme.

Transférez immédiatement les cellules dans un milieu de récupération et incubez en secouant.

Les composants du milieu favorisent la réparation membranaire et l’expression des gènes de résistance aux antibiotiques codés par plasmide.

Étalez les cellules sur de la gélose nutritive contenant l’antibiotique et incubez jusqu’à ce que des colonies se forment.

Choisissez une seule colonie et étalez-la sur une assiette