Analyse précise et à haut débit de la croissance bactérienne à l’aide d’un lecteur de microplaques

Commencez par des bactéries conservées dans un stock de glycérol, préalablement cultivées jusqu’à la phase exponentielle précoce afin d’assurer des états physiologiques uniformes et une croissance reproductible.

Ajoutez un milieu de croissance et un vortex pour resuspendre uniformément les bactéries.

Diluez en série la suspension à l’aide de milieux frais pour obtenir une plage de densités cellulaires de départ.

Chargez les échantillons dans les puits intérieurs d’une plaque multi-puits, en laissant les puits de bord remplis de milieux vierges pour minimiser la variabilité liée à l’évaporation.

Placez la plaque dans un lecteur de microplaques pour maintenir un secouement constant et une température optimale pour la croissance bactérienne.

À mesure que les bactéries se multiplient, la densité optique ou OD de la culture augmente.

Mesurez le OD à des intervalles fixes.

Soustrayez les valeurs initiales de OD obtenues des puits vierges pour corriger l’absorbance de fond.

Ensuite, il faut calculer le taux de croissance à partir de valeurs consécutives d’OD mesurées à des intervalles de temps définis, permettant une quantification précise et à haut débit de la dynamique de croissance bactérienne.

Pour enregistrer en temps réel la croissance, ajoutez environ 25 millilitres de M63 à un réservoir de réactif stérilisé. Ensuite, ajoutez 900 microlitres de M63 aux microtubes en préparation des dilutions en série. Ensuite, ajoutez 900 microlitres de M63 à la réserve de glycérol décongelée et au vortex.

Transférer 100 microlitres de la dilution 10 fois vers un autre microtube contenant 900 microlitres de M63 et un vortex. Répétez cette étape jusqu’à atteindre le nombre désiré de dilutions. Maintenant, remplissez les puits au bord d’une microplaque à fond plat stérilisé de 96 puits avec 200 microlitres de M63, à l’aide d’une pipette à huit canaux.

Chargez 200 microlitres de chaque échantillon dilué dans les puits de microplaques selon le tableau de référence. Pour éviter les couches d’allocation dues au chauffage et à l’efficacité de l’ensemencement, n’utilisez jamais les puits situés au bord de la microplaque pour vos échantillons et chargez le même échantillon dans plusieurs puits à différents endroits sur la microplaque. Placez la microplaque à 96 puits sur le lecteur de plaques.

Ouvre Lire maintenant dans le Gestionnaire des tâches et choisis le programme. Cliquez sur Ok pour commencer à mesurer. Enfin, enregistrez l’enregistrement comme un nouveau fichier expérimental pour l’analyse des données.