Analyse précise et à haut débit de la croissance bactérienne à l’aide d’un lecteur de microplaques

Commencez par des bactéries conservées dans un stock de glycérol, préalablement cultivées jusqu’à la phase exponentielle précoce afin d’assurer des états physiologiques uniformes et une croissance reproductible.

Ajoutez un milieu de croissance et un vortex pour resuspendre uniformément les bactéries.

Diluez en série la suspension à l’aide de milieux frais pour obtenir une plage de densités cellulaires de départ.

Chargez les échantillons dans les puits intérieurs d’une plaque multi-puits, en laissant les puits de bord remplis de milieux vierges pour minimiser la variabilité liée à l’évaporation.

Placez la plaque dans un lecteur de microplaques pour maintenir un secouement constant et une température optimale pour la croissance bactérienne.

À mesure que les bactéries se multiplient, la densité optique ou OD de la culture augmente.

Mesurez le OD à des intervalles fixes.

Soustrayez les valeurs initiales de OD obtenues des puits vierges pour corriger l’absorbance de fond.

Ensuite, il faut calculer le taux de croissance à partir de valeurs consécutives d’OD mesurées à des intervalles de temps définis, permettant une quantification précise et à haut débit de la dynamique de croissance bactérienne