Visualisation du stress oxydatif induit par un pathogène chez C. elegans à l’aide de SKN-1 marqué GFP

Commencez par deux plaques contenant des vers C. elegans qui expriment du SKN-1 vert fluorescent marqué par une protéine SKN-1, un facteur de transcription localisé dans le cytoplasme intestinal. Ces vers contiennent également des granules intestinaux de lipofuscine qui présentent une autofluorescence.

Une plaque est ensemencée avec des bactéries non pathogènes comme groupe témoin, l’autre avec des bactéries pathogènes comme groupe test.

Dans le groupe test, le peroxyde d’hydrogène produit par le pathogène induit un stress oxydatif, déclenchant la translocation de SKN-1 vers les noyaux intestinaux.

Dans le groupe témoin, la majorité de SKN-1 reste diffusement répartie dans le cytoplasme.

Lavez chaque plaque avec un tampon et transférez les vers dans des tubes.

Centrifugeuse pour séparer les vers et retirer le tampon.

Ajoutez un milieu contenant de l’azide de sodium pour les anesthésier.

Montez les vers sur des coussinets d’agarose, placez des couvercles et observez au microscope à fluorescence. Utilisez l’autofluorescence pour visualiser les frontières nucléaires.

Un signal nucléaire fort de SKN-1 lors du test, par rapport au signal cytoplasmique diffus dans les témoins, indique une reloca