Un système de détection de tumeur modèle et tumeur murine Orthotopique vessie

Ce protocole décrit la génération de tumeurs de la vessie orthotopique de souris femelles de souris C57BL / 6J et le contrôle de la croissance tumorale.

L’objectif global de cette méthode non chirurgicale est de produire de manière cohérente des tumeurs orthotopiques de la vessie non invasives sur le plan musculaire chez la souris qui peuvent être facilement surveillées pour l’évaluation des thérapies intravésicales. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine du cancer de la vessie. Comme l’évaluation de nouvelles thérapies intravésicales.

Le principal avantage de cette technique est qu’il est facile d’implanter des tumeurs chez la souris et de surveiller leur croissance, ce qui permet de déterminer avec précision les réponses aux thérapies. Un jour avant l’implantation, lorsque les cellules sont à environ 80 % de passage confluent vers les cellules tumorales MB49 PSA dans un milieu DMEM complet avec une séparation de un à deux. Le jour de l’intervention, prélevez et comptez les cellules, en vous assurant qu’elles sont suffisamment saines.

Mélangez un volume égal de suspension cellulaire et 4 % de bleu de trypan, et comptez les cellules vivantes colorées en bleu à l’aide d’un hémocytomètre. Les cellules doivent avoir une viabilité d’au moins 80 %. Ensuite, remettez les cellules en suspension à deux millions par millilitre dans un tube à centrifuger de 15 millilitres et lavez-les trois fois dans du DMEM.

Ensuite, conservez-les au frais jusqu’à ce qu’ils soient à injecter. Une fois qu’une souris femelle a été anesthésiée, hydratez-la par une injection intrapéritonéale de la solution Hartmanns à raison de 1 millilitre pour 10 grammes de poids corporel. Répétez cette opération toutes les une ou deux heures pendant l’anesthésie.

Ensuite, appliquez une pommade ophtalmique stérile sur les deux yeux, réappliquez au besoin. Ensuite, placez la souris en décubitus dorsal sur du papier absorbant au-dessus d’un coussin chauffant pour maintenir la température corporelle. Ensuite, fixez les pattes arrière avec du ruban adhésif.

Appliquez maintenant une légère pression sur la région abdominale inférieure et recueillez l’urine dans un tube de 1,5 millilitre pour mesurer le taux basal de PSA urinaire. Ensuite, chargez une seringue d’un millilitre avec du PLL stérile et fixez un cathéter IV de calibre 24 avec le stylet à aiguille retiré. Appliquez du lubrifiant sur l’extrémité du cathéter.

Ensuite, insérez le cathéter dans l’urètre et, à l’aide d’une pince, guidez-le vers la vessie. Arrêtez-vous lorsque la résistance se fait sentir. Ensuite, éjectez lentement 50 microlitres de PLL à raison de 10 microlitres toutes les 20 secondes pour éviter le reflux vésico-urétéral.

Laissez maintenant le cathéter dans la vessie pendant 20 minutes, avec un bouchon pour éviter l’écoulement. Après 20 minutes, retirez le cathéter et libérez la vessie de tout contenu, en appuyant doucement sur le bas-ventre. Ensuite, à l’aide d’une seringue d’un millilitre, rincez tout le contenu restant du cathéter.

Maintenant, mélangez soigneusement les cellules MB49 PSA par pipetage et chargez-les dans une seringue de 1 ml. Fixez le cathéter et lubrifiez-le comme avant. Insérez le cathéter dans la vessie comme précédemment.

Et commencez par injecter les cellules, en utilisant une éjection progressive de 10 microlitres toutes les 20 secondes. Attendez ensuite une heure. Au bout d’une heure, retirez le cathéter et libérez la vessie de tout contenu.

Ensuite, relâchez la souris en se positionnant sur sa face ventrale et ranimez-la avec une injection d’atipamezole. Maintenant, surveillez la souris jusqu’à ce qu’elle retrouve sa position couchée sternale, puis renvoyez-la dans sa cage d’origine. La sécrétion de PSA des cellules MB49 varie avec le milieu de croissance.

Le média DMEM est utilisé parce qu’il a entraîné la plus grande sécrétion de PSA. Afin de déterminer la sensibilité de l’ELISA PSA, différents nombres de cellules sécrétant MB49 PSA ont été mélangés avec des cellules mères MB49. Le test a détecté au moins 100 000 cellules sécrétant du PSA par million de cellules.

La méthode d’implantation tumorale PLL entraîne le développement de plusieurs tumeurs dans la vessie. Des collectes nocturnes d’urine à l’aide de cages métaboliques et des échantillons d’urine ponctuels pourraient être utilisés pour mesurer l’APS par ELISA. Pour toutes les études animales, le poids de la souris a été enregistré comme mesure de la santé.

Et le PSA urinaire est surveillé sur une base hebdomadaire comme mesure de la croissance tumorale. Différentes thérapies ont été utilisées sur chaque souris, ce qui a entraîné des tailles de tumeurs différentes. Deux semaines après l’implantation, les vessies ont été prélevées et traitées.

La taille des tumeurs variait, et les mesures du PSA l’avaient prédit. Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon de produire des tumeurs orthotropes de la vessie chez la souris et de surveiller leur croissance. Une fois maîtrisée, cette technique peut être réalisée en deux heures par souris.

Lors de la tentative de cette procédure, il est important de se rappeler de s’assurer que les cellules sont mélangées avant l’implantation et d’effectuer l’implantation à un rythme lent. Suite à cette procédure, d’autres méthodes, comme l’analyse cytométrique en flux de l’Uvm ou l’ELISA, peuvent être effectuées afin d’étudier l’activation immunitaire après le traitement.