Name: Procédure pour lingénierie du poumon (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-03-08T12:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 50 s
Description: Découvrez une méthode d'ingénierie pulmonaire utilisant une matrice extracellulaire décellularisée et un bioréacteur biomimétique pour générer des tissus fonctionnels capables d'échanges gazeux in vivo.

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Nous remercions Maegan B. Colehour de l&#39;aide pour le développement bioréacteur. Ces études ont été financées par l&#39;Université de Yale Département d&#39;anesthésie et par NIH 098220 HL (à LEN). THP a été soutenu par le NIH T32 GM007171.

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LEN détient des titres dans Humacyte, une société de médecine régénérative. Humacyte ne pas financer ces études, et n&#39;a pas d&#39;incidence sur la conception, l&#39;interprétation, ou la déclaration de l&#39;un des expériences ou des méthodes décrites. Les auteurs (LEN, THP, EAC) et l&#39;Université de Yale ont déposé une demande de brevet relatifs à l&#39;ingénierie des tissus des poumons.

Les aspects les plus critiques du système présentés ici incluent maintien de la stérilité, et une surveillance étroite de pressions appliquées sur le lit vasculaire à travers le processus de préparation et l&#39;ensemencement de l&#39;échafaud et la culture des poumons repeuplé. La stérilité est mieux maintenu par autoclavage tous les matériaux avant leur utilisation, ainsi que par le montage du poumon dans un système fermé, peu après explant et évitant violation ultérieure de cette barrière. Une fois la matrice décellularisé a été soigneusement rincés et transférés dans un bioréacteur stérile pour la culture, le bouchon de silicone et autres phoques et les connexions ne devraient pas être dérangé ou enlevé. Pour maintenir la pression en échec, le débit conduit par gravité est préférable lorsque cela est possible. Quand une pompe est nécessaire pour la recirculation du liquide, en commençant après le rinçage avec du PBS et continue au cours de la culture, nous vous recommandons de mesurer directement la pression juste avant que le fluide pénètre dans l&#39;artère pulmonaire avec un capteur de pression. L&#39;ampleur de la pression appliquée doit pas dépasser 15 mm Hg. Poumons Recellularized peuvent être cultivées pour différentes périodes, allant généralement de 4 jours à 3 semaines au maximum. Perfusion vasculaire est généralement réalisé à 1-3 ml / min pendant la culture endothéliales, tandis que la ventilation est généralement appliquée à un taux de 1 respiration / min pendant la culture épithéliales. Pendant les périodes de culture associée, la ventilation et la perfusion simultanée est approprié. La ventilation peut être effectuée soit avec un milieu liquide ou par air. Au cours de ces dernières décennies, plusieurs groupes ont réalisé d&#39;importants travaux d&#39;ingénierie tissulaire démontrant la faisabilité de différencier l&#39;épithélium pulmonaire in vitro et de reproduire plusieurs aspects du poumon microanatomie 7,8,9, 10. Cependant, jusqu&#39;à récemment, aucune de ces tentatives 4,5 pour concevoir les tissus pulmonaires avaient abouti à un organe implantables qui a été en mesure de maintenir la séparation entre le sang et les compartiments des voies aériennes et qui pourraient participer à l&#39;échange gazeux. Par conséquent, si les méthodes décrites ne sont qu&#39;une première étape vers l&#39;objectif à long terme de générer des tissus pulmonaires fonctionnels, ce travail est une étape encourageante vers la possibilité d&#39;augmenter la quantité de tissu pulmonaire disponibles pour la transplantation. Par ailleurs, ce travail élabore travail effectué par Ott et al. Uygun et ses collègues et de 11,12, ce qui démontre l&#39;efficacité d&#39;une matrice extracellulaire décellularisé comme un échafaudage pour l&#39;ingénierie tissulaire complexes en trois dimensions des structures et de soutenir la croissance et la survie de différents types de cellules . Ce travail est également importante pour sa contribution à l&#39;arsenal des cellules respiratoires et biologistes moléculaires. En fournissant un unique environnement tridimensionnel qui peut également fournir des stimuli mécaniques, et qui ne partage pas le risque d&#39;accompagnateur rapidement dé-différenciation que l&#39;on pourrait rencontrer lors de l&#39;épithélium de rongeurs en culture en laboratoire avec des méthodes plus traditionnelles 13, les scientifiques pourraient utiliser notre système pour gagner un nouvel éclairage sur les interactions cellule-cellule et cellule-matrice qui jouent un rôle dans la différenciation cellulaire et la fonction. Cette connaissance peut être particulièrement puissant si utilisé comme levier pour orienter le destin des différentes populations de cellules souches, en tant que groupe Cortiella a démontré dans les études initiales 14.

<table border="1"><tbody><tr><th> Nom du réactif </th><th> Société </th><th> Numéro de catalogue </th><th> Commentaires (optionnel) </th></tr><tr><td> L&#39;euthanasie </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Héparine </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> H4784 </td><td></td></tr><tr><td> Nitroprussiate de sodium </td><td> Fluka </td><td> 71778 </td><td></td></tr><tr><td> Solution de l&#39;euthanasie Euthasol </td><td> Virbac AH </td><td> 710101 </td><td> 390 mg / ml, solution de pentobarbital de sodium stocks doivent être dilués de façon appropriée pour l&#39;administration IP </td></tr><tr><td colspan="4"></td></tr><tr><td> Solution Decell </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> CHAPS </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> C3023 </td><td></td></tr><tr><td> NaCl </td><td> Américaine bioanalytiques </td><td> AB01915 </td><td></td></tr><tr><td> EDTA </td><td> Sigma </td><td> E5134 </td><td></td></tr><tr><td> NaOH </td><td> JT Baker </td><td> 3722-01 </td><td></td></tr><tr><td> PBS 1X </td><td> Gibco </td><td> 14190 </td><td></td></tr><tr><td colspan="4"></td></tr><tr><td> Composants bioréacteur </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 480 ml pot </td><td> Cole Parmer </td><td> EW-3460560 </td><td></td></tr><tr><td> Bouchon en silicone, taille 14 </td><td> Cole Parmer </td><td> EW-06298-26 </td><td></td></tr><tr><td> Y connecteurs </td><td> Cole Parmer </td><td> ED-30614-08 </td><td> Utilisé pour les canules artérielles et trachéaux </td></tr><tr><td> Tube silicone </td><td> Masterflex </td><td> 96420-14; 16 </td><td> L / S 14, 16 </td></tr><tr><td> Transducteurs de pression </td><td> Edwards Lifesciences </td><td> PX-212 </td><td></td></tr><tr><td> Clapet </td><td> Cole Parmer </td><td> EW-98553-20 </td><td> Un clapet anti-retour </td></tr><tr><td> À 4 voies robinets </td><td> Edwards Lifesciences </td><td> 594WSC </td><td></td></tr><tr><td> Filtre seringue </td><td> Cole Parmer </td><td> 2915-08 </td><td> PTFE, 0,2 um </td></tr><tr><td colspan="4"></td></tr><tr><td> Decell et apparati rinçage (ajouts à bioréacteur) </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 500 et 1000 ml bouteilles en verre </td><td> Corning </td><td> 1395-500;-1L </td><td> Utilisé pour decell et rinçage par gravité </td></tr><tr><td colspan="4"></td></tr><tr><td> Traitement Benzonase </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Pénicilline / streptomycine </td><td> Gibco </td><td> 15140122 </td><td></td></tr><tr><td> FBS </td><td> Hyclone </td><td> SH30071.03 </td><td></td></tr><tr><td> Tris-HCl </td><td> Américaine bioanalytiques </td><td> AB14043 </td><td> 1M, pH 8,0 </td></tr><tr><td> MgCl 2 </td><td> JT Baker </td><td> 2444-01 </td><td></td></tr><tr><td> BSA </td><td> Sigma </td><td> A9647 </td><td></td></tr><tr><td> Benzonase Nuclease </td><td> Sigma </td><td> E1014 </td><td> Endonucléase utilisée pour enlever vestige d&#39;ADN de la matrice </td></tr></tbody></table>

procédure pour l&#39;ingénierie du poumon

Procedure for Lung Engineering

Le tissu pulmonaire, y compris le cancer du poumon et les maladies pulmonaires chroniques telles que la bronchopneumopathie chronique obstructive, cumulativement représentent environ 280 000 décès par an; maladie pulmonaire obstructive chronique est actuellement la quatrième cause principale de décès aux États-Unis 1. Contribuer à cette mortalité est le fait que les poumons ne sont généralement pas au-delà de réparer ou de régénérer le microscopique, au niveau cellulaire. Par conséquent, le tissu pulmonaire qui est endommagé par une dégénérescence ou une infection, ou du tissu pulmonaire qui est une résection chirurgicale n&#39;est pas fonctionnellement remplacé in vivo. Pour déterminer si les tissus pulmonaires peuvent être générés in vitro, nous avons traité les poumons de rats adultes en utilisant une procédure qui supprime les composants cellulaires pour produire une matrice extracellulaire pulmonaire acellulaire échafaud. Cet échafaudage conserve les structures hiérarchiques de branchement des voies respiratoires et le système vasculaire, ainsi que d&#39;une membrane basale largement intact, ce qui comprend le collagène IV, laminine, fibronectine et. L&#39;échafaud est monté dans un bioréacteur conçu pour imiter les aspects critiques de la physiologie des poumons, telles que la ventilation à pression négative et de perfusion vasculaire pulsatile. En cultivant l&#39;épithélium pulmonaire et l&#39;endothélium vasculaire au sein de l&#39;échafaudage monté bioréacteur, nous sommes en mesure de générer des tissus pulmonaires qui est phénotypiquement comparables au tissu pulmonaire native et qui est capable de participer à un échange de gaz pour des intervalles de temps courts (de 45 à 120 minutes). Ces résultats sont encourageants et suggèrent que le repeuplement du poumon matrice est une stratégie viable pour la régénération du poumon. Cette possibilité constitue une occasion non seulement de travailler à augmenter l&#39;offre de tissu pulmonaire pour une transplantation, mais aussi à l&#39;étude des cellules des voies respiratoires et la biologie moléculaire in vitro pour des périodes plus longues et dans un microenvironnement plus précis que ce qui a été possible auparavant.

Nous avons développé une matrice extracellulaire et des poumons décellularisé bioréacteur roman biomimétiques qui peuvent être utilisés pour générer des tissus pulmonaires fonctionnelles. Par ensemencement des cellules dans la matrice et la culture dans le bioréacteur, nous générons des tissus qui démontre les échanges gazeux efficaces lorsqu&#39;elles sont transplantées in vivo pour de courtes périodes de temps.

Procédure pour l&#39;ingénierie du poumon

Le tissu pulmonaire, incluant le cancer du poumon et les maladies pulmonaires chroniques telles que la bronchopneumopathie chronique obstructive, représentent cumulativement environ 280 000 décès ...

L'objectif général de cette procédure est de générer un tissu pulmonaire en culture qui soit morphologiquement et physiologiquement comparable au tissu pulmonaire natif. Cela est réalisé en prélevant d'abord le cœur et les poumons d'un rat adulte. L'étape suivante consiste à canuler l'artère pulmonaire et la trachée, puis à connecter les poumons canulés à un bioréacteur pour la décellularisation.Après la décellularisation et le rinçage, le poumon est transféré dans un bioréacteur de culture stérile et préparé pour l'ensemencement. La dernière étape de la procédure consiste à ensemencer le compartiment souhaité du poumon avec une population cellulaire préparée. En fin de compte, des résultats peuvent être obtenus, montrant que la matrice extracellulaire décellularisée est efficacement repeuplée de cellules exprimant des marqueurs pulmonaires spécifiques à chaque région, comme le révèle la microscopie par immunofluorescence.L'avantage principal de cette technique par rapport aux méthodes existantes de culture in vitro des cellules pulmonaires est que les cellules conservent des phénotypes différenciés pendant une période prolongée, ce qui permet de les étudier pendant plusieurs semaines dans un substrat biologique tridimensionnel. Pour la décellularisation, les poumons sont reliés au bouchon du bioréacteur par l'intermédiaire de la canule vasculaire, et le bouchon est connecté à l'appareil de décellularisation. Le flacon en verre placé au-dessus des poumons est maintenu en position par un support à anneaux et une pince fixée.À ce stade, les matériaux cellulaires peuvent être éliminés afin de produire une matrice extracellulaire servant de support, qui peut ensuite être réensemencée avec des matériaux cellulaires. L'assemblage du bioréacteur pour l'ensemencement et la culture de tissu pulmonaire génie-équipé est illustré dans ce schéma. Le raccord à verrouillage de la canule trachéale se connecte à une boucle respiratoire entre le réservoir trachéal et la chambre principale.La boucle respiratoire comprend deux valves unidirectionnelles. Les positions sont disposées de sorte que le milieu suive un trajet différent à l’entrée et à la sortie du poumon. Un petit réservoir est temporairement intégré dans la ligne de perfusion pour l’ensemencement de cellules endothéliales.Une pompe pulsatile est utilisée pour acheminer les cellules du réservoir vers le compartiment vasculaire du poumon. La perfusion vasculaire est assurée à l’aide d’une pompe péristaltique. Le milieu est perfusé dans l’artère pulmonaire par le biais de la canule attachée, circule à travers le réseau vasculaire pulmonaire et ressort par la veine pulmonaire directement dans le bioreacteur principal, où le milieu est aspiré pour la perfusion.L'épithélium pulmonaire est positionné par injection dans la boucle respiratoire. La chambre principale contenant le poumon et le réservoir de trachée est utilisée pour la culture prolongée du poumon. Une fois les poumons extraits et les canules correctement insérées dans l'artère et la trachée, les poumons fraîchement prélevés doivent retenir l'air sans fuite.Cela peut être vérifié en les gonflant avec de l'air tout en étant immergés dans un liquide. Aucune bulle ne doit apparaître, ce qui indiquerait une fuite d'air. Pour commencer le protocole, les poumons sont gonflés avec du PBS contenant du nitroprussiate de sodium jusqu'à ce qu'ils soient pleins, mais sans être surgonflés ; boucher immédiatement la canule trachéale afin que les poumons restent gonflés.Ensuite, perfuser les poumons avec du PBS et du SNP pendant au moins 15 minutes à 15 millimètres de mercure. Après cela, retirer le bouchon de la canule trachéale pour permettre le dégonflement des poumons. Poursuivre la perfusion avec du PBS et du SNP de 15 à 30 minutes si nécessaire.Rechargez le PBS et le SNP afin de maintenir une pression de perfusion comprise entre 10 et 15 millimètres de mercure. Pour commencer la procédure de décellularisation prolongée, le bouchon du bioréacteur est relié à l'appareil de décellularisation. Ensuite, les poumons sont connectés au bouchon.À l’aide des raccords verrouillables reliés à la canule en forme de YS, la canule artérielle pulmonaire doit être connectée à la ligne de perfusion, tandis que la canule trachéale doit rester libre. Pour assurer une décellularisation complète du tissu, il est essentiel d’empêcher l’entrée d’air dans le système. Les valves unidirectionnelles intégrées dans les canules artérielle et trachéale permettent d’éliminer les bulles d’air dans les tubulures en autorisant un écoulement inversé dans celles-ci.Par conséquent, permettez l'élimination des bulles d'air à l'aide de la seringue et assurez-vous que toutes les lignes soient débarrassées des bulles d'air. Commencez la perfusion avec la solution de décellularisation. Perfusion effectuée avec la solution de décellularisation.Jusqu'à ce que 500 millilitres de solution aient perfusé à travers les poumons, la pression optimale est inférieure à 15 millimètres de mercure. Cela nécessitera typiquement 2,5 heures. Les débits sont généralement très lents au départ, puis augmentent rapidement durant la deuxième heure jusqu'à environ un millilitre par minute ou plus.Pendant la perfusion, retirer périodiquement le liquide de décellularisation du bioréacteur tout en veillant à ce qu'il reste suffisamment de liquide pour maintenir le poumon et la canule trachéale. Une fois la perfusion avec le liquide de décellularisation terminée, transférer les poumons et le bioréacteur dans une hotte de culture tissulaire. Pour commencer le rinçage de l'organe, retirer le flacon de 500 millilitres contenant le liquide de décellularisation et le remplacer par un flacon stérile contenant jusqu'à un litre de PBS stérile.Utilisez une aspiration sous vide ou une seringue pour vous assurer que les conduits sont débarrassés de tout air, puis perfusez du PBS à travers la vascularisation à une pression de 10 à 15 millimètres de mercure, de la même manière. Concernant la décellularisation, retirez périodiquement, en utilisant des techniques stériles, le PBS usé du bioréacteur et remplacez ou rechargez le flacon de PBS. Poursuivez le rinçage avec du PBS frais et stérile jusqu'à ce qu'au moins 2,5 litres de PBS stérile aient perfusé les poumons.Cela prendra généralement deux jours à compter du début du processus de décellularisation, une fois le rinçage terminé. Transférez les poumons vers un nouveau système de bioréacteur stérile contenant du PBS frais additionné de 10 % de FBS et de 10 % de pénicilline-streptomycine, en veillant à ce que l'ensemble du circuit de perfusion ainsi que toutes les lignes des voies aériennes soient remplis de liquide. À partir de ce moment, une pompe pulsatile sera utilisée pour perfuser les poumons à raison de cinq millimètres par minute.Stérilisez la matrice extracellulaire pulmonaire par perfusion nocturne avec du PBS contenant 10 % de FBS et 10 % de pénicilline-streptomycine. Une fois cette étape terminée, transférez les poumons dans une incubateur à 37 degrés Celsius pendant une heure ou jusqu'à ce que la température soit équilibrée. En prévision du traitement par la Ben Nase, l'étape suivante consiste à traiter les poumons avec la Ben Nase.Pour éliminer l'ADN résiduel de chaque poumon, remplir d'abord une seringue de 10 millilitres uniquement avec du tampon Ben Nase préchauffé, et une autre seringue de 10 millilitres avec 90 unités par millilitre de Ben Nase dilué dans du tampon Ben Nase. Arrêter la perfusion des poumons.Ensuite, insufflez la voie respiratoire avec du tampon Ben Nase tout en évitant d'injecter de l'air dans le poumon. Laissez le poumon se dégonfler pendant une minute. Ensuite, insufflez le poumon avec la solution Ben Nase.Encore une fois, faites attention à ne pas introduire d'air dans le poumon après l'avoir gonflé avec Ben Nase. Laissez les poumons reposer sans perfusion ni ventilation à 37 degrés Celsius pendant une heure. À la fin de cette heure, reprenez la perfusion avec le PBS contenant 10 % de FBS et 10 % de pénicilline-streptomycine déjà présent dans le bioréacteur, puis poursuivez la perfusion toute la nuit jusqu'au jour suivant.Après le rinçage et la stérilisation, la longue matrice extracellulaire peut être préparée pour la recolonisation cellulaire. Remplacez la solution de P-B-S-F-B-S benzo a par 250 millilitres de milieu de culture. Perfusez pendant au moins une heure avant d'introduire les cellules, puis remplacez par du milieu de culture frais juste avant la mise en place des cellules.De nombreuses sources cellulaires peuvent être utilisées pour la recolonisation d'organes. Ici, on démontrera l'ensemencement à l'aide d'une population cellulaire épithéliale. Préparez d'abord une seringue contenant 15 millilitres d'une suspension cellulaire de la population de cellules épithéliales souhaitée.Ensuite, remplir le réservoir aérien avec 80 millilitres de milieu de culture et s'assurer que toutes les lignes de ventilation sont débarrassées de l'air. Puis placer le bioréacteur dans une étuve à culture tissulaire à 37 degrés Celsius et connecter la pompe à seringue pour la ventilation. Ensemencer les cellules dans les poumons à l'aide d'un bolus rapide unique en injectant la suspension cellulaire de 15 millilitres dans la canule trachéale.Veillez à ce que les filtres à air du bioréacteur principal soient bouchés. Ensuite, commencez immédiatement une seule inspiration lente à l’aide de la pompe à seringue pour prélever 60 millilitres d’air du bioréacteur principal à raison de trois millilitres par minute. Cette étape durera environ 20 minutes.Laisser les poumons en statique pendant environ 18 heures après cela. Commencer la perfusion vasculaire lente à environ 0,5 millilitre par minute. Pendant la culture d'organe, la perfusion est généralement réalisée à raison d'un à trois millilitres par minute.En utilisant une pompe à rouleaux pendant la culture épithéliale, la ventilation est généralement assurée à un débit continu d'une respiration par minute et d'un volume courant de cinq à 10 millilitres. À l'aide d'une pompe à seringue, l'air est cycliquement aspiré puis injecté dans le bioréacteur afin de simuler la respiration en alternant entre une pression négative et une pression atmosphérique à l'intérieur de la chambre principale. En raison de la nécessité de maintenir le bioréacteur étanche à l'air pendant la ventilation, celle-ci doit être interrompue quotidiennement et l'air présent dans la chambre principale doit être renouvelé.En outre, le milieu doit être changé environ tous les trois à quatre jours. Pendant la culture, environ la moitié du volume total doit être renouvelée à chaque fois lors de la culture de l'épithélium pulmonaire et de l'endothélium vasculaire. Dans l'échafaudage monté sur le bioréacteur, nous sommes en mesure de générer un tissu pulmonaire capable de participer aux échanges gazeux pendant de courtes périodes.Une coloration standard hémat, toin et éoin de poumon de rat natif est présentée ici afin d'être comparée à une coloration H et E de poumon de rat décellularisé. La matrice extracellulaire finalement décellularisée devrait être totalement dépourvue de matériaux cellulaires et conserver les caractéristiques macroscopiques, microscopiques et ultrastructurales du poumon natif. La coloration H et E permettra la visualisation de tout ADN résiduel adhérant au support en raison d'une décellularisation ou d'un rinçage insuffisants, ce qui compromettrait les conditions optimales pour l'ensemencement cellulaire et la culture ultérieure du poumon.Et le bioréacteur devrait produire une distribution homogène des cellules au sein des cinq lobes du poumon et assurer une couverture d'environ 70 % du support de matrice extracellulaire. Ces images comparent le poumon natif au poumon repeuplé après coloration par immunofluorescence. Pour les principaux marqueurs pulmonaires, la population cellulaire cultivée est positive pour la protéine sécrétoire des cellules de Clara, la protéine pro-sécrétoire C et l'aquaporine 5.Les marqueurs d'intérêt sont indiqués en rouge et les noyaux colorés au DAPI apparaissent en bleu dans tous les panneaux. Une fois maîtrisée, cette procédure, de la décellularisation à la régénération, peut être réalisée en quatre à cinq jours si elle est effectuée correctement.

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Ce protocole décrit un modèle porcin juvénile d’allotransplantation orthotopique du poumon gauche conçu pour être utilisé dans le cadre de la recherche sur l’ESLP. L’accent est mis sur les techniques anesthésiques et chirurgicales, ainsi que sur les étapes critiques et le dépannage.

Transplantation orthotopique du poumon gauche dans un modèle porcin juvénile pour l’ESLP

Cet article décrit un modèle porcin de ventilation à pression négative de perfusion pulmonaire ex situ , y compris l’approvisionnement, la fixation et la gestion sur la plate-forme sur mesure. L’accent est mis sur les techniques anesthésiques et chirurgicales, ainsi que sur le dépannage.

Perfusion pulmonaire ex situ de la ventilation à pression négative normamère : évaluation de la fonction pulmonaire et du métabolisme

Ce protocole décrit une méthode pour générer des tissus pulmonaires modifiés reproductibles à petite échelle, en repeuplant des tranches pulmonaires décellularisées coupées avec précision avec des cellules épithéliales alvéolaires de type 2, des fibroblastes et des cellules endothéliales.

Tissus pulmonaires modifiés préparés à partir de tranches pulmonaires décellularisées

Le protocole décrit un bioréacteur basé sur l’imagerie qui permet l’élimination sélective de l’épithélium endogène de la trachée du rat et la distribution homogène des cellules exogènes à la surface de la lumière, suivie d’une culture in vitro à long terme de la construction du tissu cellulaire.

Bioréacteur guidé par imagerie pour la génération de tissus des voies respiratoires issus de la bioingénierie

Les poumons ex vivo sont utiles pour une variété d’expériences afin de recueillir des données physiologiques tout en excluant les variables confondantes des expériences in vivo. Les configurations commerciales sont souvent coûteuses et limitées dans les types de données qu’elles peuvent collecter. Nous décrivons une méthode de construction d’une configuration entièrement modulaire, adaptable à divers modèles d’étude.

Conception et mise en œuvre d’un modèle de perfusion pulmonaire ex vivo chez le rat

Cet article décrit comment créer des poumons de souris issus de la bio-ingénierie à l’aide de méthodes de décellularisation et de recellularisation. Il détaille également la transplantation pulmonaire orthotopique ultérieure.

Transplantation de poumon issu de la bio-ingénierie à l’aide de poumons de souris décellularisés et de cellules endothéliales humaines primaires

Ce protocole décrit une technique améliorée de transplantation orthotopique du poumon gauche chez le rat, en mettant l’accent sur la réduction des difficultés opérationnelles et l’amélioration des taux de survie.

Transplantation orthotopique du poumon gauche chez le rat

Ce protocole présente un modèle de perfusion pulmonaire ex-vivo chez le rat intégrant une exposition transitoire à un stress thermique calibré, favorisant des mécanismes de protection endogènes pour le reconditionnement thérapeutique des greffons pulmonaires endommagés. L’approche est évolutive et reproductible et soutient le développement de thérapies non médicamenteuses pour améliorer le succès de la transplantation pulmonaire.

Préconditionnement thermique lors de la perfusion pulmonaire ex-vivo pour la réhabilitation de greffons pulmonaires endommagés avant transplantation

Découvrez une méthode d'ingénierie pulmonaire utilisant une matrice extracellulaire décellularisée et un bioréacteur biomimétique pour générer des tissus fonctionnels capables d'échanges gazeux in vivo.

Procédure pour l'ingénierie du poumon

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