Name: Transplantation de poumon issu de la bio-ingénierie à l’aide de poumons de souris décellularisés et de cellules endothéliales humaines primaires (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-28T13:25:00.000+00:00
Duration: 10 min 13 s
Description: Découvrez la bio-ingénierie pulmonaire utilisant des poumons de souris décellularisés et des cellules endothéliales humaines HUVEC. Cette méthode standardisée permet d'optimiser les protocoles reproductibles pour la transplantation d'organes.

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</ol>

<table><tbody><tr><td>DÉCELLULARISATION</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>27 G x 1/2 po. Aiguille BD PrecisionGlide</td><td>BD</td><td>305109</td><td>Ou équivalent Aiguille d’injection 27 G</td></tr><tr><td>Cathéter BD Insyte IV 20 GA X 1,8 8IN</td><td>BD</td><td>381237</td><td>Ou équivalent 20 G IV Cathéter</td></tr><tr><td>Suture en soie Blade (4-0)</td><td>Nesco</td><td>GA04SB</td><td>Ou équivalent</td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C5670</td><td></td></tr><tr><td>Cathéter pour veine jugulaire de rat, PU 2Fr 10 cm</td><td>Instech</td><td>C20PU-MJV1301</td><td>Recommandé pour les souris pesant 30 g et moins.</td></tr><tr><td>Cathéter pour veine jugulaire de rat, PU 3Fr 10 cm</td><td>Instech</td><td>C30PU-RJV1307</td><td>Recommandé pour les souris pèse plus de 30 g.</td></tr><tr><td>DNase I</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>DN25</td><td></td></tr><tr><td>MgSO4</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M7506</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S3014</td><td></td></tr><tr><td>PinPort injecteurs</td><td>Instech</td><td>PNP3M</td><td></td></tr><tr><td>PinPorts, 22 G</td><td>Instech</td><td>PNP3F22-50</td><td>Convient aux C30PU-RJV1307</td></tr><tr><td>PinPorts, 25 G</td><td>Instech</td><td>PNP3F25-50</td><td>Convient à C20PU-MJV1301</td></tr><tr><td>Désoxycholate de sodium</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D6750</td><td></td></tr><tr><td>Seringue stérile, 5 mL</td><td>Générique</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>9036-19-5</td><td></td></tr><tr><td>CELL CULTURE</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>EGM-2 Endothélial Cell Growth Medium-2 BulletKit</td><td>Lonza</td><td>CC-3162</td><td></td></tr><tr><td>HUVEC &ndash ; Cellules endothéliales de la veine ombilicale humaine</td><td>Lonza</td><td>C2519A</td><td></td></tr><tr><td>BIORÉACTEUR</td><td></td><td></td><td></td>À PERFUSION</tr><tr><td>aiguille de 20 g Robinet d’arrêt</td><td>générique</td><td></td><td></td></tr> à <tr><td>3 voies</td><td>Générique</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Perceur de liège</td><td>Générique</td><td></td><td>Taille de forage, 6-10 mm</td></tr><tr><td>Tête de pompe EasyLoad III</td><td>Cole-Parmer</td><td>243934</td><td></td></tr><tr><td>Verre bidon</td><td>Hario</td><td>SCN-200T</td><td>Diamètre intérieur : 80 mm</td></tr><tr><td>Agitateur magnétique chauffant</td><td>Raccord de</td><td></td><td></td></tr><tr><td>leurre, PVDF, Pour Soft Tube</td><td>Nordson Medical</td><td>2-9965-01</td><td>Femelle, s’adapte aux tubes avec D.I. 1,5 mm (L/S 14)</td></tr><tr><td>Raccord de leurre, PVDF, Pour Soft Tube</td><td>Nordson Medical</td><td>2-9964-01</td><td>Mâle, s’adapte aux tubes avec D.I. 1,5 mm (L/S 14)</td></tr><tr><td>Raccord de leurre, PVDF, Pour Soft Tube</td><td>Nordson Medical</td><td>2-9965-03</td><td>Femelle, s’adapte aux tubes avec D.I. 3 mm (L/S 16)</td></tr><tr><td>Raccord de leurre, PVDF, Pour Tube Souple</td><td>Nordson Medical</td><td>2-9964-03</td><td>Mâle, s’adapte aux tubes avec D.I. 3 mm (L/S 16)</td></tr><tr><td>Barre d’agitation magnétique Générique</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Masterflex L/S Digital Precision Modular Drive avec E/S à distance et contrôleur de paillasse</td><td>Cole-Parmer</td><td>07557-00</td><td></td></tr><tr><td>Tube de pompe de précision Masterflex L/S, PharMed BPT, L/S 16</td><td>Cole-Parmer</td><td>06508-16</td><td></td></tr><tr><td>Tube de pompe à Pricision Masterflex L/S, silicone durci au platine, L/S 14</td><td>Cole-Parmer</td><td>96410-14</td><td></td></tr><tr><td>Millex-GP Unité de filtre à seringue, 0,22 & micro ; m, polyéthersulfone, 33 mm, stérilisé aux rayons</td><td>gamma Millipore</td><td>SLGPR33RS</td><td></td></tr><tr><td>Pyrex 250 mL flacon d’herbe, GL-45 bouchon à vis Corning</td><td></td><td>1395-250</td><td></td></tr><tr><td>Septa en silicone pour GL45 Open Top PBT Bouchon à vis</td><td>Corning</td><td>1395-455S</td><td></td></tr><tr><td>Bouchon de lumière en silicone</td><td>IMG</td><td>07763-18</td><td>Diamètre supérieur : 87 mm, Diamètre inférieur : 75 mm</td></tr><tr><td>Seringue stérile, 10 mL, 50 mL</td><td>Générique</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CHIRURGIE DE LA SOURIS (Isolement du bloc cœur-poumon | Transplantation pulmonaire)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>10-0 Attaches en nylon</td><td>Kono Seisakusho</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>10-0 Attaches en soie</td><td>Kono Seisakusho</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>4-0 Attaches en soie</td><td>Kono Seisakusho</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Pince artérielle, 45 mm incurvée, rainurée</td><td>Natsume seisakusyo</td><td>C-17-45</td><td></td></tr><tr><td>BD Insyte IV Cathéter 24GA</td><td>BD</td><td>381512</td><td>Or cathéter i.v. équivalent 24G</td></tr><tr><td>Bulldog Pince vasculaire 45mm incurvé</td><td>Natsume seisakusyo</td><td>M2</td><td></td></tr><tr><td>Butorphanol tartrate&nbsp ;</td><td>Meiji Seika Pharma</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Cefazolin Sodium</td><td>Otsuka Pharmaceutical</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Pince Dumont #5/45</td><td>Outils de science fine</td><td>1251-35</td><td></td></tr><tr><td>Ciseaux à ressort fins de style vannas</td><td>Outils de science fine</td><td>15403-08</td><td>Pointe de 45 po, 0,01 x 0,06 mm</td></tr><tr><td>Kit de cauterie Gemini</td><td>Appareil Harvard</td><td>RS-300</td><td></td></tr><tr><td>Halsted-Mosquito pince à pointe incurvée, 125 mm</td><td>Centre de biorecherche</td><td>16181670</td><td></td></tr><tr><td>Porte-aiguille Hegar, 150 mm</td><td>B Braun/Aesculap</td><td>BM065R</td><td></td></tr><tr><td>Solution d’héparine</td><td>Mochida Seiyaku</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Medetomidine</td><td>Nippon Zenyaku Kogyo</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Micro pince droite</td><td>B Braun/Aesculap</td><td>BD33R</td><td></td></tr><tr><td>Midazolam</td><td>Sandoz</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Ventilateur de souris</td><td>Harvard Appareil</td><td>Modèle 687&trade ;</td><td></td></tr><tr><td>Saline normale, qualité clinique</td><td>Otsuka Pharmaceutical</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Boîte de Pétri, 60 x 15 mm</td><td>BD</td><td>351007</td><td></td></tr><tr><td>Safelet Cath PU Cathéter en polyuréthane de calibre 20</td><td>Nipro</td><td>09-031</td><td></td></tr><tr><td>Ciseaux en acier inoxydable Sakaki incurvés 14 cm</td><td>Centre de biorecherche</td><td>64152034</td><td></td></tr><tr><td>Porte-scalpel</td><td>Centre de biorecherche</td><td>16101040</td><td></td></tr><tr><td>Système de rétraction pour petits animaux</td><td>Outils scientifiques fins</td><td>18200-20</td><td></td></tr><tr><td>Scalpel à lame de rechange #11</td><td>Muranaka Medical Instruments</td><td>567-001-03</td><td></td></tr><tr><td>Ciseaux à ressort, 15 cm</td><td>Centre de biorecherche</td><td>PRI13-3736</td><td></td></tr><tr><td>Stéréomicroscope</td><td>Leica Microsystems</td><td>M525</td><td>Un microscope chirurgical de qualité clinique avec un système de bras flexible est préférable.</td></tr><tr><td>Clip d’anévrisme en titane Sugita incurvé slim, No.98</td><td>Mizuho medical</td><td>17-001-98</td><td></td></tr><tr><td>Applicateur de clip en titane Sugita, 110 mm</td><td>Mizuho medical</td><td>17-013-53</td><td></td></tr><tr><td>Réchauffeur électrique réglable en température</td><td>Générique</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Coton-tige ultrafin</td><td>Générique</td><td></td><td></td></tr><tr><td>BRASSARD</td><td></td><td></td><td></td>VASCULAIRE ET BRONCHIQUE</tr><tr><td>Fin papier de verre</td><td>Générique</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Venula 20 gauge Teflon angiocatheter</td><td>Top</td><td>1160</td><td></td></tr><tr><td>Venula 22 gauge Teflon angiocatheter</td><td>Top</td><td>1161</td><td></td></tr><tr><td>Venula 24 gauge Teflon angiocatheter</td><td>Top</td><td>1124</td><td></td></tr></tbody></table>

transplantation de poumon issu de la bio-ingénierie à l’aide de poumons de souris décellularisés et de cellules endothéliales humaines primaires

Transplantation of Bioengineered Lung Using Decellularized Mouse Lungs and Primary Human Endothelial Cells

Selon le protocole de décellularisation, les poumons de souris sont visiblement blancs et translucides (Figure 6A). Les composants cellulaires doivent être entièrement éliminés, mais la structure alvéolaire reste intacte lors de l’observation histologique (Figure 6B,C). Des poumons de souris recellularisés à l’aide de 3 × 107 HUVEC avec une culture de bioréacteur à perfusion de 2 jours montrent une distribution homogène des HUVECs (<s...

Transplantation de poumon issu de la bio-ingénierie à l’aide de poumons de souris décellularisés et de cellules endothéliales humaines primaires

Lung transplantation is a critical treatment for patients with end-stage lung diseases like idiopathic pulmonary fibrosis, but challenges such as donor ...

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Bioengineering

Bioingénierie

Nous avons développé une matrice extracellulaire et des poumons décellularisé bioréacteur roman biomimétiques qui peuvent être utilisés pour générer des tissus pulmonaires fonctionnelles. Par ensemencement des cellules dans la matrice et la culture dans le bioréacteur, nous générons des tissus qui démontre les échanges gazeux efficaces lorsqu'elles sont transplantées in vivo pour de courtes périodes de temps.

Procédure pour l&#39;ingénierie du poumon

La décellularisation de l’organe entier produit des échafaudages biologiques naturels qui peuvent être utilisés pour la médecine régénérative. La description d’un modèle de primate non humain de régénération pulmonaire dans lequel des poumons entiers sont décellularisés, puis ensemencés avec des cellules souches adultes et des cellules endothéliales dans un bioréacteur qui facilite la circulation vasculaire et la ventilation des milieux liquides, est présentée.

Décellularisation et recellularisation pulmonaires de primates non humains à l’aide d’un bioréacteur spécialisé à grands organes

Afin de comprendre les mécanismes cellulaires et moléculaires qui sous-tendent néo-tissu formation et le développement de la sténose dans les valves cardiaques de l'ingénierie tissulaire, un modèle murin de coeur hétérotopique vanne transplantation a été développé. Une valvule cardiaque pulmonaire a été transplanté au destinataire en utilisant la technique de transplantation cardiaque hétérotopique.

Transplantation de valve pulmonaire en utilisant un modèle de souris de transplantation cardiaque hétérotopique

La récapitulation du microenvironnement spécifique à l’organe, qui stimule l’angiogenèse locale, est indispensable pour une régénération réussie des tissus endommagés. Ce rapport fait la démonstration d’une nouvelle méthode pour implanter des gels de fibrine à la surface pulmonaire d’une souris vivante afin d’explorer comment le microenvironnement spécifique aux poumons module l’angiogenèse et la régénération alvéolaire chez la souris adulte.

Implantation de fibrine Gel sur la souris Lung pour étudier l&#39;angiogenèse pulmonaire spécifique

Ici, nous présentons un protocole pour générer de l'ingénierie tissulaire greffes de vaisseaux qui sont fonctionnels pour le greffage dans des souris en double ensemencement partiellement induite sur les cellules souches pluripotentes (IPFPC) - dérivé des cellules musculaires lisses et l'IPFPC - cellules endothéliales dérivées sur une décellularisée navire échafaudage bioréacteur.

Génération et greffage des navires par ingénierie tissulaire dans un modèle de souris

Ce protocole dirige efficacement la souris souches embryonnaires endoderme définitif dérivé des cellules matures voies respiratoires cellules épithéliales. Cette technique de différenciation utilise trois dimensions échafauds pulmonaires décellularisé pour diriger la spécification de la lignée de poumon, dans un environnement de culture exempt de sérum défini.

Génération de cellules de souris Airway épithéliales ESC dérivés Utilisation décellularisé Lung échafauds

Ce protocole décrit une méthode pour générer des tissus pulmonaires modifiés reproductibles à petite échelle, en repeuplant des tranches pulmonaires décellularisées coupées avec précision avec des cellules épithéliales alvéolaires de type 2, des fibroblastes et des cellules endothéliales.

Tissus pulmonaires modifiés préparés à partir de tranches pulmonaires décellularisées

Dans cet article, des cellules endothéliales pulmonaires primaires ont été isolées et cultivées à partir de souris néonatales.

Isolement de cellules endothéliales pulmonaires primaires de souris

Un protocole pour l’isolement du tissu pulmonaire décellularisé régional est présenté ici. Ce protocole fournit un outil puissant pour étudier les complexités de la matrice extracellulaire et des interactions cellule-matrice.

Dissection et isolement de tissu pulmonaire décellularisé spécifique à une région

Ici, nous présentons un protocole d’imagerie intravitale du poumon gauche de souris transplantée à l’aide de la microscopie à deux photons. Il s’agit d’un outil précieux pour étudier la dynamique cellulaire et les interactions en temps réel après une transplantation pulmonaire murine.

Microscopie intravitale à deux photons du poumon de souris transplanté

Découvrez la bio-ingénierie pulmonaire utilisant des poumons de souris décellularisés et des cellules endothéliales humaines HUVEC. Cette méthode standardisée permet d'optimiser les protocoles reproductibles pour la transplantation d'organes.

Transplantation de poumon issu de la bio-ingénierie à l’aide de poumons de souris décellularisés et de cellules endothéliales humaines primaires (Vidéo) | JoVE Journal

Transplantation de poumon issu de la bio-ingénierie à l’aide de poumons de souris décellularisés et de cellules endothéliales humaines primaires

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