Sectionnement, coloration et imagerie TEM d’exosomes intégrés : un protocole pour visualiser les caractéristiques structurelles des exosomes à l’aide de la TEM

Les exosomes sont des vésicules sphériques de taille nanométrique entourées d’une bicouche lipidique contenant des molécules d’ADN, d’ARN et de protéines présentes à l’intérieur de la lumière.

Pour visualiser la structure de l’exosome à l’aide de la microscopie électronique à transmission, ou MET, commencez par prendre un bloc d’exosome - un bloc de matrice solide contenant les exosomes intégrés. À l’aide d’un ultra-microtome, obtenir des coupes ultraminces du bloc d’exosomes.

Récupérez la section de l’exosome sur une grille appropriée et laissez-la adhérer à la surface. La grille fournit un support stable à l’échantillon d’exosome pour les étapes de coloration ultérieures.

Ensuite, placez la grille sur une goutte d’acétate d’uranyle - une coloration de métal lourd - et incubez pendant la durée souhaitée. Les ions uranyle interagissent avec les lipides, les protéines, les ADN et les ARN présents dans les exosomes.

Par la suite, colorez la section de l’exosome avec du citrate de plomb, qui se lie également aux biomolécules exosomales. Le citrate de plomb se lie faiblement aux ions uranyle pré-liés et améliore le contraste avec le bruit de fond pendant l’imagerie.

Observez les exosom