Immunomarquage à l’or des coupes exosomiques : une technique pour visualiser les marqueurs diagnostiques dans la lumière exosomale

Les exosomes sont de petites vésicules extracellulaires renfermant une variété de biomolécules qui servent de biomarqueurs du cancer.

Pour visualiser les biomarqueurs exosomaux, commencez par des coupes exosomiques ultraminces intégrées dans de la résine soutenues par des grilles métalliques de microscopie électronique appropriées. Incuber les grilles dans des gouttes de glycine. La glycine se lie et neutralise les groupes aldéhydes réactifs dans les sections pour surmonter leur interférence avec le dosage.

Rincez l’échantillon à l’eau pour éliminer les réactifs résiduels. Ensuite, incubez l’échantillon dans un tampon de blocage. Le tampon porte des protéines sériques qui bloquent les sites de liaison des anticorps non spécifiques dans l’échantillon.

Ensuite, incubez l’échantillon dans la solution d’anticorps primaire souhaitée. Ces anticorps reconnaissent et se lient à leurs biomarqueurs cibles localisés dans la lumière exosomale. Lavez tous les anticorps non liés avec un tampon approprié.

Maintenant, transférez les grilles portant l’échantillon dans des gouttes contenant des anticorps secondaires conjugués à l’or qui se fixent aux anticorps primaires. Les nanoparticules d’or serv