Isolement de noyaux à partir de tissus de gliome frais congelés : une méthode pour obtenir des noyaux intacts à partir d’échantillons de tumeurs de gliome

Pour isoler les noyaux, commencez par prélever un échantillon de gliome frais et congelé - une tumeur qui prend naissance dans les cellules gliales du cerveau - dans une boîte de Pétri.

Placez la boîte de Pétri sur de la glace pour éviter la dégradation des tissus.

Ensuite, coupez l’échantillon de tissu en petits morceaux.

Ajoutez un tampon de lyse pré-refroidi aux morceaux de tissu hachés. Transférez le mélange dans un homogénéisateur Dounce. À l’aide du pilon, homogénéisez le tissu pour désintégrer les cellules et initier la lyse.

Maintenant, transférez l’homogénat dans un tube de microcentrifugation contenant un tampon de lyse frais.

Perturber mécaniquement l’homogénat à l’aide d’une pointe de pipette à large diamètre. Cette étape facilite la libération des organites cytoplasmiques des cellules.

Par la suite, à l’aide d’une crépine cellulaire de taille appropriée, filtrez l’homogénat dans un tube frais pour éliminer les débris tissulaires et autres contaminants.

Après filtration, prélever le filtrat contenant les différents organites cellulaires.

Centrifuger le filtrat à basse vitesse pour granuler les noyaux plus denses au fond tandis que les autres organites cellulaires resten