Isolement de populations cellulaires à partir de tissus cérébraux à l’aide du tri des noyaux activés par fluorescence
Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 3:14 min • July 8th, 2025
Transférez un morceau de tissu cérébral humain fraîchement congelé dans un broyeur approprié contenant un tampon de lyse froide.
Déplacez le pilon de haut en bas pour briser mécaniquement le tissu, libérant ainsi les cellules.
Les molécules détergentes du tampon de lyse brisent la membrane cellulaire, libérant les noyaux.
Transférez le contenu dans un tube à centrifuger approprié et ajoutez un tampon de saccharose froid au fond du tube, créant ainsi un gradient de densité.
Centrifugeuse à grande vitesse pour séparer les noyaux au fond du tube.
Jetez le surnageant et remettez les noyaux en suspension dans une solution saline tamponnée.
Ajoutez des anticorps conjugués aux fluorophores spécifiques de la cible dans les noyaux et incubez pour permettre à l’anticorps de se lier à sa protéine nucléaire cible.
Ajoutez un colorant de coloration nucléaire pour visualiser l’ADN intact.
Effectuez un tri des noyaux activés par fluorescence pour trier les noyaux de différentes populations cellulaires en fonction de signaux de fluorescence distincts.
Commencez à disséquer environ 200 à 400 milligrammes de tissu à partir d’un échantillon de tissu du cortex adulte humain frais et congelé. Placez le
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