Isolement de l’ADN libre circulant (cfDNA) : une procédure membranaire à base de silice pour extraire l’ADNcf du plasma sanguin de patients atteints de cancer

Les ADNcf circulants sont de courts fragments d’ADN principalement libérés par les cellules cancéreuses subissant l’apoptose. Les cfDNA sont des biomarqueurs prometteurs du cancer et peuvent être isolés à partir de fluides corporels tels que le plasma.

Pour isoler l’ADNcf, prélevez d’abord un échantillon de plasma d’un patient cancéreux. Ensuite, traitez le plasma avec un tampon de lyse contenant de la protéinase K, des sels chaotropes et de l’ARN porteur. Les sels chaotropiques dénaturent les protéines, libérant des ADNcf liés à partir des protéines. La protéinase K inactive les nucléases, minimisant ainsi la dégradation de l’ADNcf.

Ensuite, ajoutez le tampon de liaison souhaité à l’échantillon. Assemblez une colonne de centrifugation contenant une matrice de silice en phase solide sur l’appareil à vide. Chargez l’échantillon dans la colonne. Appliquez le vide pour faire passer l’échantillon à travers la membrane de silice.

L’ARN porteur se lie de manière non spécifique aux parois du tube. Cette liaison non spécifique ainsi que la présence de sels dans le tampon facilitent la liaison de l’ADNcf à la membrane de silice, augmentant ainsi la récupération des ADNcf. Les protéines et a