Dosage de l’absorption des vésicules extracellulaires : méthode de visualisation et de quantification de l’absorption cellulaire des vésicules extracellulaires à l’aide d’une technique d’imagerie par fluorescence 3D

Pour faciliter la communication cellulaire, les cellules sécrètent des vésicules extracellulaires, des VE - des structures de taille nanométrique entourées d’une membrane lipidique. Les VE transportent diverses cargaisons biologiques, y compris des macromolécules et des métabolites, pour les livrer aux cellules réceptrices.

Pour visualiser l’absorption des VE par les cellules à l’aide de la microscopie confocale, prenez d’abord des VE fraîchement isolés. Ces VE sont pré-marqués avec des anticorps liés à une sonde fluorescente pour une visualisation ultérieure facile.

Ajoutez un volume adéquat de VE marqués par fluorescence à une culture cellulaire réceptrice adhérente. Incuber pendant la période souhaitée. Au cours de l’incubation, une sous-population des VE marqués se fixe superficiellement à la surface de la cellule, tandis que d’autres VE sont internalisés.

Ajoutez un colorant fluorescent différent pour marquer le cytoplasme cellulaire, ce qui permet de distinguer les VE internalisées de celles qui adhèrent à la cellule réceptrice. Placez les cellules sous un microscope confocal et imagez à différents plans focaux le long de l’axe z, en acquérant une série de sections optiques s