PCR bloquante de type sauvage pour détecter les mutations somatiques à basse fréquence

La réaction en chaîne par polymérase bloquante de type sauvage, ou WTB-PCR, détecte les mutations ponctuelles en amplifiant sélectivement les allèles mutants de faible abondance tout en inhibant l’amplification des allèles de type sauvage de haute abondance dans les échantillons d’ADN.

La WTB-PCR utilise des acides nucléiques verrouillés, ou des oligonucléotides modifiés monocaténaires contenant des LNA complémentaires au brin d’ADN de type sauvage de l’échantillon qui se lie spécifiquement au brin complémentaire. La liaison LNA bloque l’activité de l’ADN polymérase et inhibe l’élongation de l’ADN matrice de type sauvage.

Pour effectuer une WTB-PCR, prenez un mélange maître contenant des dNTP, des LNA et des amorces directes et inverses spécifiques à la cible dans de l’eau distillée sans nucléase.

Ajoutez une solution thermostable contenant de l’ADN polymérase dans le tube et pipetez le mélange dans le puits d’une plaque de PCR. Ajoutez l’échantillon d’ADN génomique contenant de l’ADN de type sauvage et mutant dans le puits et commencez la PCR.

Au cours de la PCR, la dénaturation médiée par haute température sépare les ADN double brin. Les brins séparés servent de modèles pour les