Encyclopédie des expériences JoVE
Techniques biologiques
0 vues • 3:20 min • July 8th, 2025
La réaction en chaîne par polymérase imbriquée, la PCR imbriquée, peut amplifier sélectivement des séquences génétiques spécifiques.
Pour détecter une séquence virale cible, commencez par un mélange maître contenant des amorces externes complémentaires à une région d’ADN plus grande contenant la séquence virale ciblée, des dNTP et de l’ADN polymérase thermostable dans un tampon approprié.
Ajoutez de l’ADN viral double brin, extrait des cellules infectées par le virus, à ce mélange. Transférez le tube dans un thermocycleur ; exécuter le premier cycle de PCR.
Lors de la dénaturation, l’ADN double brin produit deux matrices simple brin. À une température de recuit appropriée, les amorces externes se lient à leurs séquences cibles correspondantes. Plus tard, l’ADN polymérase étend les amorces à l’aide de dNTP, produisant de grands amplicons, contenant la séquence spécifique dans l’ADN amplifié.
Transférez ces amplicons dans un nouveau tube. Complétez avec un mélange maître frais contenant des amorces internes ou imbriquées ciblant une séquence plus petite et plus spécifique dans l’ADN amplifié plus grand. Exécutez la deuxième PCR.
Au cours de la deuxième PCR, le brin d’ADN se dénature.
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