Purification d’affinité de complémentation bimoléculaire pour isoler deux protéines en interaction

Pour détecter et isoler une paire de protéines spécifiques en interaction à l’aide de la purification par affinité de complémentation bimoléculaire, ajoutez une paire de plasmides de complémentation de fluorescence bimoléculaire et d’agent de transfection dans une plaque de culture contenant des cellules de mammifères.

Un plasmide code pour une protéine en interaction – la protéine d’appât – fusionnée à un fragment de protéine fluorescente rapporteur. L’autre plasmide code pour l’autre protéine de liaison – la protéine de proie – fusionnée au fragment complémentaire de la protéine fluorescente.

couver. L’agent de transfection facilite l’absorption cellulaire plasmidique. Les cellules transfectées avec succès expriment des protéines localisées dans la membrane cellulaire.

Les interactions entre les protéines appâts-proies rapprochent les fragments de protéines fluorescentes. Cela provoque la fusion et le repliement des fragments, formant la protéine fluorescente fonctionnelle, dont la fluorescence peut être visualisée au microscope à fluorescence.

Remplacez le milieu par un tampon de lyse contenant un détergent non ionique pour perturber les membranes cellulaires, libérant ainsi les