Génération d’un modèle murin de paludisme cérébral expérimental à l’aide de sporozoïtes dérivés de moustiques hôtes

Commencez par un tube contenant des glandes salivaires de moustiques femelles infectées par Plasmodium berghei , un parasite responsable du paludisme.

Perturber mécaniquement les glandes, libérant les sporozoïtes - une forme infectieuse du parasite dans le milieu.

Granulez les fractions de glandes et les débris. Récupérez le surnageant contenant du sporozoïte et injectez-le dans la veine de la queue d’une souris immobilisée.

Les sporozoïtes injectés voyagent dans la circulation sanguine et atteignent le foie, où ils infectent les hépatocytes et se multiplient, formant des mérozoïtes - une forme invasive du parasite.

Au fil du temps, les hépatocytes libèrent des mérozoïtes dans la circulation sanguine, envahissant les globules rouges, ou globules rouges.

À l’intérieur des globules rouges, les mérozoïtes se répliquent de manière asexuée, se développant sous une forme mature et exprimant des antigènes dérivés du parasite à la surface des globules rouges.

Ces antigènes se lient aux récepteurs endothéliaux, y compris ceux des vaisseaux sanguins du cerveau, ce qui entraîne la séquestration des globules rouges infectés et non infectés.

Cette accumulation anormale de globules rouges perturbe la barrière hémato-encéphalique, provoquant une accumulation de liquide dans le parenchyme du cerveau et développant un paludisme cérébral chez la souris.

Commencez par prélever les moustiques femelles de leur cage 17 à 22 jours après le repas de sang. À l’aide d’une pince, placez 3 à 4 moustiques sur une lame de verre recouverte d’une goutte de milieu RPMI froid. Ensuite, placez la lame sous un microscope.

Étirez soigneusement le moustique entre la tête et le corps à l’aide d’une pince et utilisez une seringue et une aiguille pour isoler la glande salivaire. Ensuite, récupérez les glandes salivaires de la lame de verre en les aspirant avec une pipette en verre et en les transférant dans un tube à centrifuger de 1,5 millilitre. Ensuite, utilisez un petit bâtonnet en plastique pour écraser les glandes salivaires isolées dans le tube de centrifugation pendant trois minutes afin d’isoler les sporozoïtes du tissu des glandes salivaires.

Centrifugez pendant trois minutes à 1 000 fois g à 4 degrés Celsius pour purifier les sporozoïtes des tissus restants. Pipetez le surnageant, qui contient les sporozoïtes, dans un nouveau tube à centrifuger, et comptez les sporozoïtes purifiés dans un hémocytomètre Neubauer. Les sporozoïtes présentent un mouvement typique dans le sens inverse des aiguilles d’une montre.

Ensuite, ajustez la concentration des sporozoïtes purifiés à 10 000 par millilitre en ajoutant une solution saline tamponnée au phosphate. Enfin, placez une souris C57BL6 dans une contention et mettez sa queue dans de l’eau chaude pour mieux visualiser la veine de la queue. Ensuite, injectez un total de 1 000 sporozoïtes, soit 0,1 millilitre, dans la veine de la queue pour initier l’infection.