Encyclopédie des expériences JoVE
Immunologie
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Prenez des splénocytes appauvris en globules rouges dans un tampon contenant un colorant fluorescent sensible au calcium perméable aux cellules, Indo-1 AM.
Les estérases intracellulaires clivent l’Indo-1 AM en Indo-1 imperméable à la membrane, qui se lie aux ions calcium, changeant le signal de fluorescence de l’Indo-1 du bleu au violet.
Introduire des anticorps spécifiques de l’antigène conjugués aux fluorophores qui se lient spécifiquement aux antigènes respectifs sur les cellules.
À l’aide de la cytométrie en flux, identifiez les lymphocytes B marqués au fluorophore et mesurez leur rapport de fluorescence violet-bleu Indo-1.
Maintenant, traitez les cellules avec des liposomes antigéniques comprenant des fragments IgM Fab conjugués à des bicouches de liposomes.
Les récepteurs des lymphocytes B se lient aux antigènes couplés aux liposomes, activant les tyrosine kinases cytoplasmiques associées et déclenchant l’activation de la phospholipase-C gamma-2.
La phospholipase-C activée clive le phospholipide membranaire, le phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate, générant des seconds messagers, y compris l’inositol 1,4,5-trisphosphate, ou IP3.
L’IP3 se lie aux canaux calciques IP3-dépendan
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