Un test de codage à barres pour la caractérisation phénotypique et fonctionnelle des cellules immunitaires
Encyclopédie des expériences JoVE
Immunologie
0 vues • 5:42 min • July 8th, 2025
Commencez par des échantillons d’essai contenant des cellules immunitaires stimulées et fixes.
La stimulation induit l’expression de marqueurs spécifiques dans les cellules, tandis que la fixation préserve les marqueurs phénotypiques, y compris les antigènes de surface cellulaire, et les marqueurs d’état fonctionnel, y compris les cytokines.
Ajoutez une combinaison unique d’anticorps conjugués aux isotopes des métaux lourds à chaque échantillon.
Cette technique permet d’attribuer un code-barres unique à plusieurs échantillons, en distinguant chaque échantillon par sa combinaison d’isotopes de métaux lourds.
Les anticorps se lient à un épitope commun, codant à barres toutes les cellules des échantillons.
Combinez tous les échantillons à code-barres dans un seul tube, pour un traitement en aval.
Ajoutez un cocktail d’anticorps conjugués au métal pour colorer les antigènes de surface.
Ajouter un tampon de perméabilisation pour augmenter la perméabilité de la membrane cellulaire pour la coloration intracellulaire.
Ajoutez un autre ensemble d’anticorps conjugués aux métaux pour colorer les cytokines intracellulaires.
Le code-barres permet la coloration et l’acquisition simultanées des é
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