Microscopie quantitative à intervalle temporel pour l’évaluation de la dissémination bactérienne dépendante de la rigidité de la matrice extracellulaire

Prenez une plaque multi-puits avec des monocouches de cellules endothéliales humaines adhérentes sur des hydrogels de polyacrylamide recouverts de collagène de rigidité variable.

Les cellules sur des hydrogels plus rigides subissent une réorganisation cytosquelettique importante, augmentant la tension intracellulaire, par rapport aux hydrogels plus mous.

Lavez les cellules avec un milieu et ajoutez-y Listeria monocytogenes modifié, exprimant une protéine fluorescente sous le promoteur de la protéine induisant l’assemblage de l’actine (ActA).

Centrifugeuse pour faciliter le contact cellule-bactérie. Incuber pour médier l’endocytose bactérienne.

Laver avec un média. Traiter avec de la gentamicine pour éliminer les bactéries non internalisées. Couver.

Les bactéries internalisées libèrent des toxines formant des pores, perturbant les membranes phagosomiques. Les bactéries cytosoliques régulent à la hausse l’expression de l’ActA et des protéines fluorescentes, marquant les bactéries intracellulaires.

Les protéines ActA induisent la polymérisation de l’actine, formant une queue de comète d’actine propulsant les bactéries vers l’avant, provoquant l’internalisation par les cellules voisine