Encyclopédie des expériences JoVE
Immunologie
0 vues • 3:31 min • July 8th, 2025
Commencez par une boîte de culture contenant des cryosections de jéjunum de souris fixées au formol et remplies de gélatine avec des cellules de touffe avec des microvillosités apicales et des somas en forme de bobine.
Laver avec un tampon contenant un détergent pour perméabiliser les membranes cellulaires.
Ajouter une solution alcaline de récupération d’antigène. Incuber pour briser les réticulations protéiques induites par la fixation, révélant les protéines pour la coloration.
Appliquez une solution bloquante pour empêcher la liaison d’anticorps non spécifiques.
Superposition avec des anticorps primaires ciblant une protéine de liaison à l’actine, spécifiquement phosphorylée dans les cellules de la touffe.
Retirez les anticorps non liés. Introduire un mélange d’anticorps secondaires conjugués au fluorophore, de colorant de liaison à l’ADN et de colorant fluorescent à la phalloïdine.
Les anticorps secondaires se lient aux anticorps primaires, le conjugué phalloïdine-colorant fluorescent marque l’actine et le colorant de liaison à l’ADN marque les noyaux cellulaires.
Retirez les composants non liés et ajoutez un tampon sans détergent.
Transférez la section sur une diapositive en v
Consultez la transcription complète et accédez à des milliers de vidéos scientifiques