Détection de protéines prions anormales dans le tissu cérébral à l’aide de l’immunohistochimie

Prenez une diapositive avec une section fixe du cerveau de mammifère présentant des agrégats de protéines prions mal repliés.

Traitez la section avec de l’acide formique pour réduire l’infectiosité des agrégats de prions.

Traiter avec un tampon acide à l’intérieur d’une chambre de pression hydratée. Une chaleur élevée et une rupture du pH acide induites par la fixation se réticulent, démasquant les épitopes antigéniques.

Immerger dans le peroxyde d’hydrogène pour inactiver la peroxydase endogène, évitant ainsi les taches de fond indésirables.

Placez la lame dans une plaque de recouvrement et ajoutez un tampon pour maintenir l’hydratation des tissus.

Introduire une solution bloquante, empêchant la liaison d’anticorps non spécifiques.

Ajouter un anticorps primaire spécifique aux agrégats de prions.

Retirez les molécules d’anticorps non liées. Introduisez un anticorps secondaire biotinylé qui se lie à l’anticorps primaire.

Retirez les molécules d’anticorps non liées. Ajoutez une enzyme peroxydase biotinylée complexée avec de l’avidine qui se lie à la biotine sur l’anticorps secondaire.

Ajoutez un substrat chromogène, que la peroxydase oxyde en un produit coloré.

À l’aide d’un microsco