Un modèle d’interposition aortique chez la souris pour étudier le rejet vasculaire induit par l’allo-immunité

Préparez une souris donneuse anesthésiée et placez-la en position couchée. Faites une incision médiane pour exposer la cavité abdominale.

Extérioriser l’intestin pour localiser l’aorte abdominale infrarénale ou AIA sous les artères rénales, transportant le sang oxygéné.

Séparez l’AIA de la veine cave inférieure adjacente, qui transporte le sang désoxygéné.

Lissez les petites branches près de l’AIA et fixez l’AIA pour obstruer la circulation sanguine.

Réséquez un segment de longueur appropriée et placez-le dans une solution saline.

Répétez la procédure avec une souris receveuse d’un patrimoine génétique différent.

Implantez l’AIA du donneur dans le receveur, en l’adaptant à son orientation anatomique.

Effectuez des anastomoses de bout en bout en suturant les extrémités du greffon donneur aux extrémités receveuses.

Relâchez les pinces et vérifiez que le flux sanguin est normal sans fuite. Remettez l’intestin dans la cavité abdominale. Ensuite, suturez le site d’incision.

Le modèle est maintenant prêt à étudier les réponses immunitaires contre le greffon IAA transplanté.

Commencez par placer la souris donneuse en position couchée sur une planche de plexiglas mince et propre enveloppée dans un drapé stérile sous le microscope opératoire à un grossissement de 8 à 30X.

Après avoir confirmé une anesthésie chirurgicale adéquate par pincement des orteils, utilisez des ciseaux stériles pour faire une seule incision médiane du pubis au processus xiphoïde. Ensuite, utilisez un petit écarteur pour ouvrir les parois abdominales, exposant la cavité abdominale. Ensuite, utilisez des applicateurs stériles à embout de coton pour rétracter doucement les intestins vers le haut vers la gauche de l’animal. Couvrez le tissu avec de la gaze imbibée de solution saline et déplacez les organes reproducteurs vers le bas pour localiser l’aorte infrarénale et la veine cave inférieure ou VCI.

Maintenant, utilisez la pince médicale numéro 5 pour séparer l’aorte de la VCI au niveau de l’artère rénale gauche près de la bifurcation. Ensuite, utilisez des sutures monofilament de polyamide 10-0 pour ligaturer les petites branches près de l’aorte. Lorsque l’aorte du donneur et la VCI ont été séparées, saturez le vaisseau de solution saline. Couvrez la cavité exposée avec de la gaze humidifiée et placez le donneur de côté dans un endroit stérile.

Maintenant, placez la souris receveuse sous le microscope et séparez l’aorte receveuse de la VCI comme nous venons de le démontrer. Ensuite, placez deux pinces microvasculaires de 4 millimètres proximales et distales au segment d’intérêt à environ 5 millimètres l’une de l’autre. Ensuite, à l’aide de microciseaux Vannas-Tübingen, effectuez une seule aortotomie horizontale et ne réséquez pas plus de 0,5 millimètre de l’aorte abdominale pour accueillir la greffe aortique donneuse.

Renvoyez le donneur au microscope et transectez un segment de greffe de 3 à 4 millimètres comme nous venons de le démontrer. Alors. Utilisez une aiguille de calibre 25 5/8 pour rincer l’aorte excisée avec une solution saline héparinisée, en veillant à ce que la pointe de l’aiguille n’entre pas en contact avec le vaisseau, et placez le récipient dans un récipient de solution saline héparinisée sur de la glace.

Dans les 30 minutes suivant l’excision, placez le greffon aortique donneur en position orthotopique chez le receveur, en faisant correspondre l’orientation anatomique du greffon respectif avec celle du receveur. Ensuite, saisissez doucement la tunique externe du vaisseau et utilisez la pince numéro 5 pour l’inverser légèrement. Maintenant, utilisez la pince pour enfoncer une aiguille attachée à une suture monofilament de polyamide 10-0 à travers toute l’épaisseur de la paroi du vaisseau afin de fixer le greffon aortique du donneur au vaisseau réséqué du receveur.

Pour la mise en place de points continus, positionnez les sutures à 9 heures dans les extrémités supérieure et inférieure du greffon. Ensuite, en commençant par l’extrémité supérieure du greffon à partir de 3 heures, anastomose les extrémités réséquées avec deux sutures courantes et fixe la suture à la suture de séjour. Ensuite, retournez le greffon et continuez la suture courante jusqu’à la partie dorsale du vaisseau, à la rencontre de la suture d’origine. Fixez la suture sans appliquer beaucoup de pression sur le vaisseau et répétez la suture pour l’anastomose inférieure.

Une fois l’anastomose terminée, relâchez la pince microvasculaire distale pour permettre un flux sanguin rétrograde à travers le vaisseau. Si aucun saignement n’est observé, relâchez la pince proximale. Si aucune obstruction sanguine n’est observée, utilisez une paire de pinces pour saisir doucement une extrémité des sutures de hauban et détournez légèrement le vaisseau pour inspecter la paroi arrière du vaisseau. Aucun pli ne doit être observé. Si un pouls vigoureux est observé dans les vaisseaux du donneur et du receveur, utilisez des applicateurs à bout de coton pour ramener les intestins dans la cavité abdominale.

Enfin, à l’aide d’un porte-aiguille et d’une pince Graefe, fermez la paroi abdominale à l’aide de sutures en polypropylène 5-0 et de points de suture continus. À l’aide d’une fermeture sous-cuticulaire, fermez la couche de peau avec les mêmes sutures. La fonction motrice des membres postérieurs peut être observée pour évaluer le succès de la chirurgie.