Purification de nanoparticules de protéines auto-assemblées à l’aide de la chromatographie d’affinité

Prenez une suspension de bactéries modifiées exprimant des nanoparticules de protéines recombinantes auto-assemblées avec des marqueurs de polyhistidine.

Sonicate pour libérer les composants intracellulaires.

Centrifugeuse pour recueillir le surnageant contenant des nanoparticules de protéines. Diluez-le avec un tampon sans imidazole.

Prenez une colonne de chromatographie d’affinité contenant des billes d’agarose avec des cations nickel immobilisés.

Ajouter un tampon à faible concentration d’imidazole pour l’équilibrage de la colonne.

Ajoutez le lysat bactérien sur la colonne.

Au cours de l’exploitation, la polyhistidine sur les nanoparticules de protéines se lie fortement aux cations nickel.

Pendant ce temps, les contaminants tels que les lipopolysaccharides bactériens et d’autres protéines se lient faiblement à la colonne.

Laver avec un tampon contenant une faible concentration d’imidazole pour éliminer les protéines faiblement liées.

Introduisez de l’isopropanol pour éliminer les lipopolysaccharides, puis lavez.

Ensuite, introduisez un tampon avec une concentration intermédiaire d’imidazole. L’imidazole entre en compétition avec l’histidine pour se lier au cation nickel, libéran