Isolement de cellules souches du cervelet de souris postnatal et différenciation en cellules neurales

Prenez des cellules isolées d’un cervelet de souris nouveau-né contenant des cellules souches, des neurones et des cellules gliales.

Ajoutez des microbilles magnétiques enrobées d’anticorps qui se lient à une glycoprotéine de surface spécifique aux cellules souches.

Centrifugez, retirez les billes non liées et remettez les cellules en suspension dans un tampon.

Chargez les cellules sur une colonne de séparation placée dans un séparateur magnétique, qui retient les cellules souches liées aux microbilles pendant que d’autres cellules circulent.

Ajoutez un milieu neurosphérique pour éluer les cellules et les transférer dans une microplaque. Incuber pour induire la formation de neurosphères primaires, colonies de cellules souches qui s’auto-renouvellent.

Centrifugez et jetez le fluide. Remettre les neurosphères en suspension dans un milieu contenant des enzymes pour digérer les protéines d’adhésion cellulaire.

Centrifugez et retirez les enzymes. Ajoutez le milieu neurosphérique et dissociez mécaniquement les cellules.

Incuber pour permettre la prolifération des cellules souches et la formation de la neurosphère secondaire, tandis que les cellules différenciées dépourvues de caractérist