Utilisation de réseaux de multiélectrodes pour mesurer la physiologie synaptique dans des sphères de coculture 3D

Prenez un réseau de multiélectrodes stériles ou MEA, un appareil qui enregistre l’activité électrique des cellules cibles.

Ajoutez une solution polymère à l’AEM et incuberez.

Le polymère recouvre la surface du MEA, augmentant ainsi la propriété d’attraction de l’eau de la surface.

Retirez l’excès de polymère et lavez-le à l’eau déminéralisée.

Ajoutez de la matrice extracellulaire, ou ECM, et incubez pour lui permettre d’enrober le MEA. Retirez l’excédent d’ECM.

Ensuite, ajoutez les sphères de coculture 3D composées de neurones et d’astrocytes dans un support adapté.

Incuber pour permettre aux sphères d’adhérer à la surface du MEA.

Placez le MEA sur un étage de tête à température contrôlée d’un système MEA et enregistrez l’activité électrique spontanée à travers les électrodes.

L’activité électrique mesurée correspond à la communication au niveau des jonctions neuronales au sein de la sphère.

Commencez par enduire la surface de chaque réseau de multiélectrodes ou MEA avec 1 millimètre de poly-ornithine pour rendre la surface hydrophile et incubez à 37 degrés Celsius pendant au moins quatre heures. Après l’incubation, retirez la poly-ornithine et lavez la surface de chaque MEA avec de l’eau désionisée. Ensuite, ajoutez 1 millilitre de matrice extracellulaire et retournez dans l’incubateur pendant au moins quatre heures.

Lorsque vous êtes prêt, retirez la matrice extracellulaire, puis appliquez les sphères dans 1,5 millilitre de milieu sur la surface MEA, en vous assurant que les sphères sont positionnées au-dessus du réseau d’électrodes. Laisser adhérer pendant deux jours. Pour mesurer l’activité électrique des sphères neuronales, placez le MEA sur une scène de tête à température contrôlée.