Mesure de l’activité neuronale dans une tranche de cerveau de souris après une incubation prolongée
Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 2:55 min • July 8th, 2025
Fixez une tranche de cerveau de souris dans une chambre d’enregistrement, perfusée avec de l’aCSF oxygéné après une incubation prolongée.
Les cellules de la tranche sont chargées d’un indicateur de calcium, ce qui facilite les mesures de calcium intracellulaire.
Prenez une pipette d’enregistrement comprenant une électrode dans une solution d’électrolyte.
Identifiez un neurone cible. Positionnez la pipette enregistreuse avec une pression positive sur la membrane cellulaire, créant ainsi une fossette.
Appliquez une pression négative pour créer un joint étanche.
De plus, appliquez des impulsions de pression négative, rompant la membrane et établissant une configuration de cellule entière.
Perfuser un LCR à haute concentration en potassium, qui dépolarise la membrane du neurone.
La dépolarisation ouvre les canaux sodiques, déclenchant un potentiel d’action, qui à son tour active les canaux calciques voltage-dépendants et permet l’afflux de calcium.
Les ions calcium se lient à l’indicateur, améliorant la fluorescence, qui peut être visualisée sous un éclairage approprié.
L’augmentation de la fluorescence intracellulaire, causée par l’afflux de calcium après l’application de potassium, i
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