Quantification de la distribution d’une protéine présynaptique dans le cerveau de la souris à l’aide de l’immunofluorescence

Prenez une tranche de cerveau de souris fixée chimiquement et intégrée dans un milieu d’enrobage tissulaire.

Lavez la tranche avec un tampon pour retirer le support.

Ajoutez une solution qui perméabilise les membranes et bloque les sites de liaison non spécifiques.

Retirez la solution.

Pour visualiser les protéines synaptiques neuronales, incubez la tranche avec des anticorps primaires.

Ces anticorps ciblent une protéine présynaptique exprimée dans les synapses de régions cérébrales spécifiques et une protéine synaptique exprimée de manière ubiquitaire comme marqueur de référence.

Laver avec un tampon pour éliminer les anticorps non liés.

Introduire des anticorps secondaires marqués au fluorophore qui ciblent les anticorps primaires.

Laver avec un tampon pour éliminer les anticorps secondaires non liés.

Contre-colorez les noyaux avec un colorant de liaison à l’ADN.

Laver avec un tampon et monter la tranche à l’aide d’un support de montage approprié.

Visualisez la tranche au microscope confocal.

Calculez les rapports moyens d’intensité de fluorescence de la protéine cible et du marqueur de référence pour analyser la distribution de la protéine cible dans différentes régions du cerve