Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
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Commencez avec des thoraces de Drosophila de type sauvage et transgénique chimiquement fixées dans un tampon.
Chez les thoraces transgéniques, les jonctions neuromusculaires des muscles longitudinaux dorsaux contiennent des neurones qui expriment une protéine mutante induisant la neurodégénérescence.
Retirez le tampon et congelez les thoraces pour éviter d’endommager les tissus pendant la bissection.
Ajoutez un tampon frais et transférez les thoraces dans des boîtes de dissection.
Positionnez un thorax ventral vers le haut et retirez les grappes de cellules nerveuses pour exposer la ligne médiane.
Coupez en deux le long de la ligne médiane pour obtenir des hémitoraces.
Retirez l’excès de tissu.
Incuber les hémithoraces dans un tampon bloquant pour perméabiliser les membranes et empêcher la liaison d’anticorps non spécifiques.
Ajouter des anticorps conjugués aux fluorophores ciblant une glycoprotéine exprimée dans les neurones NMJ et les filaments d’actine musculaire.
Retirez les anticorps non liés.
Disposez les hémithoraces sur une glissière de pont, ajoutez un support de montage et montez les tissus.
Visualisez au microscope.
Par rapport au type sauvage, les mutants présentent une
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