Imagerie et quantification des agrégats protéiques dans les cerveaux de drosophiles génétiquement modifiés
Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 5:47 min • July 8th, 2025
Commençons par des cerveaux de drosophile génétiquement modifiés. Ces cerveaux expriment une protéine mutante marquée fluorescente rouge dans le neurone qui peut se propager à la cellule gliale environnante, exprimant la protéine normale marquée fluorescente jaune, provoquant leur agrégation.
Ajoutez une solution fixatrice qui préserve l’intégrité cellulaire.
Retirez le fixateur et lavez-le avec un tampon.
Ajoutez un réactif anti-décoloration et incubez pour éviter la décoloration des signaux fluorescents.
Transférez les cerveaux sur une lame et retirez l’excès de liquide.
Laissez le cerveau adhérer à la lame.
À l’aide de petits morceaux d’une lamelle comme entretoises, placez une lamelle sur eux. Ajoutez le réactif anti-décoloration et scellez-le.
Sous un microscope confocal, capturez des images en utilisant différentes longueurs d’onde d’excitation pour la fluorescence rouge et jaune.
À l’aide d’un logiciel d’analyse d’images, quantifiez les agrégats de protéines.
La co-localisation de la fluorescence rouge et jaune indique la propagation des protéines mutantes.
Une fois que tous les cerveaux ont été disséqués, transférez le tube de prélèvement dans un nutator à température ambia
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