Mesure de l’activité du protéasome dans différents compartiments subcellulaires du cerveau du rat
Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 4:10 min • July 8th, 2025
Commençons par des fractions nucléaires et synaptiques subcellulaires recueillies dans l’amygdale latérale du cerveau de rats témoins et de rats conditionnés par la peur.
Chaque fraction subcellulaire contient des concentrations variables de protéasomes 20S, le noyau catalytique du complexe de protéasomes responsable de la dégradation des protéines cellulaires indésirables.
Ajouter un tampon de dosage contenant de l’ATP et un substrat peptidique fluorogène aux échantillons et incuber.
En présence d’ATP, le protéasome clive le peptide fluorogène, libérant des molécules fluorogéniques libres.
À l’aide d’un lecteur de plaques, mesurez l’intensité de la fluorescence à intervalles réguliers.
Quantifiez la fluorescence en la comparant aux concentrations standard connues de la molécule fluorogénique.
L’intensité de fluorescence est proportionnelle à l’activité du protéasome dans l’échantillon.
L’augmentation de l’activité du protéasome dans la fraction nucléaire des rats conditionnés par la peur suggère des changements dans l’expression des gènes liés à la mémoire, tandis qu’une diminution de l’activité dans la fraction synaptique indique des changements dans l’expression des protéines sy
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