Imagerie du trafic de la protéine GLUT4 dans les neurones hypothalamiques primaires de souris à l’aide de la microscopie à déconvolution

Commence avec des neurones hypothalamiques primaires de souris de type sauvage et CCR5-knock-out cultivés sur des lamelles enrobées de poly-D-lysine dans une plaque multi-puits.

Ces neurones expriment le transporteur de glucose 4 marqué par une protéine fluorescente verte (GFP-GLUT4) dans le cytoplasme.

Transférez les lamelles sur des lames de verre et essuyez doucement l’excès de support pour assurer la stabilité lors de l’acquisition de l’image.

Place une lame sur la platine du microscope à déconvolution avec la lamelle vers le bas.

Visualisez les neurones sous un éclairage en fond clair, puis traitez-les avec la chimiokine CCL5 et l’insuline séquentiellement.

Passez à l’éclairage par fluorescence pour identifier les neurones cibles exprimant GFP-GLUT4 et ajustez les paramètres d’imagerie pour capturer des images fluorescentes en direct.

Dans les neurones de type sauvage, l’insuline et la CCL5 se lient respectivement au récepteur de l’insuline et au CCR5, activant les voies de signalisation en aval qui entraînent la translocation membranaire GFP-GLUT4.

Dans les neurones knock-out CCR5, CCL5 ne parvient pas à se lier, ce qui entraîne une réduction de la translocation GFP-GLUT4.

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