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DOI: 10.3791/60113-v
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This study presents a protocol for evaluating the balance between glutamate release and clearance at single corticostriatal glutamatergic synapses using acute slices from adult mice. By employing the fluorescent sensor iGlu u for glutamate detection, researchers can identify local mismatches in transmitter dynamics, aiding in the investigation of dysfunctional synapses in disease contexts.
Nous présentons un protocole pour évaluer l’équilibre entre la libération de glutamate et le dégagement aux synapses glutamatergics corticostriatal simples dans des tranches aigues des souris adultes. Ce protocole utilise le capteur fluorescent iGluu pour la détection de glutamate, une caméra sCMOS pour l’acquisition du signal et un dispositif pour l’éclairage laser focal.
L’imagerie haute résolution de synapses simples exprimant un capteur de glutamate rapide permet de détecter l’inadéquation locale entre la libération de l’émetteur et l’absorption. Dans le cas de la maladie, cette méthode peut être utilisée pour identifier les synapses dysfonctionnelles. Pour la correction de l’autofluorescence, d’abord, placez une tranche de cerveau de la souris d’intérêt dans la chambre d’enregistrement d’un microscope à un photon.
Submergez la tranche dans du liquide céphalo-rachidien artificiel oxygéné et utilisez l’objectif d’immersion d’eau 20x pour localiser le striatum dorsal. Fixez les tranches avec une grille en nylon sur une harpe platine pour minimiser le mouvement des tissus et passez à l’objectif d’immersion d’eau 63x. À l’aide d’un filtre à passage élevé à 510 nanomètres, acquérir ensemble une image des structures positives du capteur autofluorescent et glutamate.
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