Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 4:28 min • April 28th, 2025
Placez une tranche de cerveau de souris dans une chambre de perfusion contenant du LCR a, sous un microscope à deux photons.
La souris est génétiquement modifiée pour exprimer la GFP dans la microglie, ce qui permet le suivi des mouvements microgliaux.
Fixez la tranche avec un support.
À l’aide d’un éclairage en fond clair, localisez la région d’intérêt.
Passez à l’éclairage par fluorescence pour visualiser la microglie.
Remplissez une micropipette avec le composé testé, montez-la sur un porte-seringue et abaissez-la pour toucher la tranche.
Activez le mode d’imagerie à deux photons, en concentrant la lumière proche infrarouge de faible énergie dans le tissu.
Au point focal du laser, deux photons combinent leur énergie pour exciter la GFP, émettant une fluorescence.
Capturez des images sur plusieurs plans Z pour vous concentrer sur les processus microgliaux.
Enregistrez l’activité de base, puis injectez le composé et poursuivez l’enregistrement.
Le composé se lie aux récepteurs microgliaux, déclenchant des voies de signalisation qui entraînent l’extension du processus microglial vers la source du composé.
Surveillez l’augmentation de la fluorescence près du site d’injection au fil du temps p
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