Imagerie simultanée de la dynamique microgliale et de l’activité neuronale chez une souris éveillée
Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 3:13 min • May 29th, 2025
Commençons par une souris transgénique fixée dans un cadre stéréotaxique, avec une fenêtre crânienne implantée sur son cortex visuel.
La souris exprime l’EGFP dans la microglie et le R-CaMP, un indicateur de calcium fluorescent rouge, dans les neurones du cortex visuel.
Placez la souris sous un microscope à deux photons et ajustez la lentille de l’objectif pour qu’elle se concentre sur la surface du cerveau.
Déplacez la souris avec le cadre stéréotaxique de l’objectif et fixez-y un dispositif d’ombrage.
Remplissez le dispositif d’ombrage avec de l’eau et repositionnez la souris sous le microscope.
Couvrez l’objectif d’une feuille noire.
Le dispositif d’ombrage et la feuille bloquent les interférences lumineuses externes, assurant une imagerie précise.
Placez un écran LCD devant l’œil de la souris pour fournir une stimulation visuelle.
Réglez les paramètres d’imagerie et commencez l’imagerie.
La stimulation visuelle déclenche l’excitation neuronale, entraînant un afflux de calcium et une augmentation de la fluorescence du R-CaMP.
Pendant ce temps, les microglies rétractent leurs processus tout en interagissant avec les neurones activés, comme observé par imagerie en direct.
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