Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 6:37 min • May 29th, 2025
Fixez une souris anesthésiée avec une fenêtre crânienne sur son cortex moteur sur un tapis roulant.
La souris exprime un rapporteur de la protéine kinase-A dans les neurones corticaux.
Placez le tapis roulant sous un objectif FLIM à deux photons.
Ajoutez une gouttelette d’eau entre l’objectif et la fenêtre crânienne.
Laissez la souris se réveiller et s’acclimater au tapis roulant.
À l’aide d’un éclairage en fond clair, localisez la zone d’imagerie. Fermez l’enceinte du microscope pour bloquer la lumière externe.
Réglez les paramètres d’imagerie, lancez la rotation du tapis roulant pour induire la locomotion et commencez l’imagerie.
La locomotion forcée active la PKA, qui phosphoryle le rapporteur, rapprochant ses fluorophores donneur et accepteur.
Le microscope dirige un laser infrarouge, incitant le donneur à transférer de l’énergie à l’accepteur, réduisant ainsi la durée de vie de la fluorescence du donneur.
Lorsque la locomotion s’arrête, la PKA et le rapporteur retournent à leur état inactif, ce qui diminue le transfert d’énergie et augmente la durée de vie de la fluorescence du donneur.
Analysez les images pour comparer les niveaux de PKA corticale au repos et en locomotion.
Au moins
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