Imagerie à vie en fluorescence de l’agrégation de la protéine PolyQ dans les neurones de Caenorhabditis elegans

Commençons par des vers Caenorhabditis elegans anesthésiés, du même âge, et des vers Caenorhabditis elegans déficients en chaperons.

Les deux groupes expriment dans leurs neurones des protéines polyQ marquées au fluorophore qui sont sujettes à un mauvais repliement.

Chez les vers témoins, les protéines chaperonnes limitent l’agrégation de polyQ mal repliés, tandis que chez les vers déficients en chaperons, les polyQ mal repliés forment facilement des agrégats.

Placez la lame de contrôle sur une platine de microscope confocal pour la microscopie d’imagerie à durée de vie en fluorescence (FLIM).

Illuminez les vers à l’aide d’un laser pulsé.

Le laser excite le fluorophore, qui émet un photon lorsqu’il revient à l’état fondamental.

FLIM mesure la durée de vie de la fluorescence, c’est-à-dire la durée pendant laquelle le fluorophore reste dans son état excité.

Chez les vers déficients en chaperons, l’agrégation polyQ regroupe les fluorophores, favorisant le transfert d’énergie entre les fluorophores adjacents au lieu de l’émission de photons, réduisant ainsi la durée de vie de la fluorescence.

Le logiciel FLIM traite ces durées de vie pour générer des cartes codées en couleur, ce qui per