Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 3:18 min • June 17th, 2025
Prenez des neurones corticaux primaires de rongeurs cultivés sur une boîte à fond de verre recouverte de support.
Ces cellules expriment une protéine associée à la SLA codée génétiquement et un biocapteur de calcium.
Remplacez le média par un tampon à faible teneur en chlorure de potassium.
Incuber pour maintenir l’activité neuronale au repos et les niveaux de calcium de base.
Montez la parabole sur une platine de microscope confocal et positionnez la tubulure de perfusion.
À l’aide d’un éclairage en champ clair, concentrez-vous sur les neurones, puis passez à l’imagerie par fluorescence.
À l’aide du laser du microscope, excitez le biocapteur et enregistrez l’émission de fluorescence pour déterminer les niveaux de calcium intracellulaire de base.
Ensuite, perfuser le plat avec un tampon de chlorure de potassium élevé.
La forte concentration de potassium dépolarise les neurones, ouvrant des canaux calciques voltage-dépendants au niveau des terminaisons présynaptiques. Cela permet l’afflux de calcium, qui initie l’activité synaptique neuronale.
L’augmentation du calcium intracellulaire se lie au biocapteur, provoquant un changement de conformation qui améliore la fluorescence.
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