Visualisation de la migration des cellules de la crête neurale dans un embryon de poisson-zèbre à l’aide de l’imagerie multiphotonique en accéléré

Commencez avec un embryon de poisson-zèbre transgénique vivant et déchorionné incorporé dans de l’agarose à bas point de fusion et placé dans une chambre remplie de milieux embryonnaires.

L’embryon exprime des cellules de crête neurale marquées à la protéine fluorescente verte améliorée (EGFP).

Positionnez la chambre sur la platine du microscope. À l’aide d’un éclairage en fond clair, ajustez l’objectif pour qu’il fasse la mise au point et centre l’embryon dans le champ de vision.

Passez à l’objectif d’immersion dans l’eau et recentrez sur l’embryon.

Ajustez les paramètres d’imagerie pour acquérir des images de la pile Z du bord latéral au bord médial, en capturant la largeur de l’œil.

Désactivez l’éclairage en fond clair, couvrez la scène et lancez l’imagerie en accéléré.

Remplissez la chambre de média au besoin pendant l’imagerie.

Sous éclairage laser, les cellules de la crête neurale deviennent fluorescentes.

Visualisez la migration de ces cellules du tube neural vers les régions craniofaciales, autour de l’œil en développement pour peupler le mésenchyme périoculaire et le processus fronto-nasal, et ventralement pour former les arcs pharyngiens.

Après avoir placé l’ensemble de l’install