Name: en cours danalyse In Vivo Migration cellulaire en utilisant Transplantations cellulaires et imagerie time-lapse en Zebrafish Embryons (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-04-29T14:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 39 s
Description: Découvrez l'analyse de la migration cellulaire in vivo par transplantation cellulaire et imagerie en temps réel chez l'embryon de zèbre Danio rerio. Cette méthode permet d'étudier le rôle des gènes candidats dans la biologie du développement.

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Nous remercions F. Bouallague et la animalerie IBENS pour l’excellence des soins prodigués aux poissons-zèbres. Les recherches dont il est question dans cette publication ont été soutenues par la Fondation ARC pour la recherche sur le cancer, subventions N° SFI20111203770 et N° PJA 20131200143.

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<li>Burkel, B. M., Von Dassow, G., Bement, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Versatile+fluorescent+probes+for+actin+filaments+based+on+the+actin-binding+domain+of+utrophin%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Motility+and+the+Cytoskeleton%22%5BJournal%5D)">Versatile fluorescent probes for actin filaments based on the actin-binding domain of utrophin.</a> Cell Motility and the Cytoskeleton. 64 (11), 822-832 (2007).</li>
<li>Yoo, S. K., Deng, Q., Cavnar, P. J., Wu, Y. I., Hahn, K. M., Huttenlocher, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+regulation+of+protrusion+and+polarity+by+PI3K+during+neutrophil+motility+in+live+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+cell%22%5BJournal%5D)">Differential regulation of protrusion and polarity by PI3K during neutrophil motility in live zebrafish.</a> Developmental cell. 18 (2), 226-236 (2010).</li>
<li>Spracklen, A. J., Fagan, T. N., Lovander, K. E., Tootle, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pros+and+cons+of+common+actin+labeling+tools+for+visualizing+actin+dynamics+during+Drosophila+oogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+biology%22%5BJournal%5D)">The pros and cons of common actin labeling tools for visualizing actin dynamics during Drosophila oogenesis.</a> Developmental biology. 393 (2), 209-226 (2014).</li>
<li>Johnson, H. W., Schell, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuronal+IP3+3-kinase+is+an+F-actin-bundling+protein%3A+role+in+dendritic+targeting+and+regulation+of+spine+morphology%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+biology+of+the+Cell%22%5BJournal%5D)">Neuronal IP3 3-kinase is an F-actin-bundling protein: role in dendritic targeting and regulation of spine morphology.</a> Molecular biology of the Cell. 20 (24), 5166-5180 (2009).</li>
<li>Yi, J., Wu, X. S., Crites, T., Hammer, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Actin+retrograde+flow+and+actomyosin+II+arc+contraction+drive+receptor+cluster+dynamics+at+the+immunological+synapse+in+Jurkat+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Biology+of+the+Cell%22%5BJournal%5D)">Actin retrograde flow and actomyosin II arc contraction drive receptor cluster dynamics at the immunological synapse in Jurkat T cells.</a> Molecular Biology of the Cell. 23 (5), 834-852 (2012).</li>
</ol>

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Ce protocole présente un moyen facile d&#39;étudier le rôle d&#39;un gène candidat dans la migration cellulaire in vivo, en combinant la création d&#39;embryons chimères en utilisant une transplantation de cellules avec l&#39; imagerie en direct. Création d&#39;embryons mosaïques Étude de la dynamique d&#39;une cellule nécessite la visualisation de son contour pour analyser les extensions cytoplasmiques. Ceci peut être réalisé par marquage des cellules i...

Dans les organismes multicellulaires, la migration cellulaire est essentielle à la fois pour le développement de l&#39;embryon où elle assure l&#39;organisation des cellules dans les tissus et organes, et la vie adulte, où elle participe à l&#39;homéostasie tissulaire (cicatrisation des plaies) et l&#39;immunité. En plus de ces fonctions physiologiques, la migration des cellules est également impliqué dans diverses situations pathologiques, y compris, en particulier, les métastases du cancer. La migration cellulaire a été analysée in vitro pendant des décennies, fournissant une compréhension globale des mécanismes moléculaires assurant les mouvements cellulaires sur des surfaces planes. In vivo cependant, les cellules sont confrontés à un environnement plus complexe. Il est apparu clairement au cours des dernières années que la migration au sein d&#39;un organisme peut être influencé par des signaux externes tels que la matrice extracellulaire, des cellules ou des chimiokines sécrétées guidage migration voisine, et que les mécanismes d&#39;entraînement la migration cellulaire peut varier de ce qui a été décrit &lt;em&gt; in vitro 1,2. Les mécanismes assurant la migration cellulaire in vivo ont reçu moins d&#39; attention jusqu&#39;à présent, principalement en raison de la difficulté technique accrue, par rapport à des études in vitro. In vivo analyse de la migration cellulaire , en particulier nécessite un accès optique directe aux cellules migrantes, techniques pour marquer les cellules uniques afin de voir leur dynamique et leur morphologie, ainsi que le gain ou la perte de fonction des approches pour tester le rôle des gènes candidats. Jusqu&#39;à présent, seuls quelques systèmes modèles hébergeant ces caractéristiques ont été utilisées pour disséquer vivo la migration cellulaire 3. Nous avons récemment utilisé la migration de la plaque préchordale prospective dans les embryons de poisson zèbre début comme un nouveau système de modèle pratique pour évaluer la fonction des gènes candidats dans le contrôle de la migration cellulaire in vivo 4,5 dans. Plaque préchordale prospective (également connu sous mesendoderm antérieur) est un groupe de cellules formant au début de Gastrulation sur la face dorsale de l&#39;embryon. Au cours de la gastrulation ce groupe migre collectivement vers le pôle animal de l&#39;embryon 6-8, pour former la plaque préchordale, un épaississement de mesendodermal, antérieure à la notochorde, et qui sous - tend la plaque neurale. La partie antérieure de la plaque préchordale donnera lieu à l&#39; éclosion de la glande, tandis que sa partie postérieure contribue probablement à la tête mésoderme 9. Merci au développement externe et de la clarté optique de l&#39;embryon de poisson, la migration cellulaire peut être directement et facilement observée dans cette structure. La transplantation de cellules est une technique très puissante qui permet la création rapide et facile des embryons en mosaïque 10. Exprimer des marqueurs fluorescents cytosquelette dans les résultats des cellules transplantées dans l&#39;étiquetage des cellules isolées, la morphologie et la dynamique qui peuvent être facilement observés. La combinaison de cette perte ou gain de fonction des approches permet l&#39;analyse des fonctions des cellules autonomes d&#39;une boîtegène didat. Le protocole présenté décrit comment nous avons évalué la fonction de la composante sin1 de TORC2 dans le contrôle de la migration cellulaire et l&#39; actine dynamique in vivo 5. Mais, comme mentionné dans les résultats et discuté plus loin, il pourrait être utilisé pour analyser l&#39;implication potentielle d&#39;un gène candidat pour contrôler la migration des cellules in vivo.

<table><tbody><tr><td>Capillaires en verre (diamètre extérieur 1,0 mm, diamètre intérieur 0,58 cm ; mm)</td><td>Appareil de Harvard</td><td>300085</td> capillaires <td>en verre d’épaisseur standard</td></tr><tr><td>(diamètre extérieur 1,0 mm, diamètre intérieur 0,78 mm)</td><td>Appareil de Harvard</td><td>300085</td><td></td></tr><tr><td>pénicilline-streptomycine</td> à paroi mince <td>Sigma-Aldrich</td><td>P4333</td><td>10&nbsp ; 000&nbsp ; unités de pénicilline et de 10 mg streptomycine par ml</td></tr><tr><td>pince fine</td><td>Dumont Fine Science Tools</td><td>11254-20</td><td>5F</td></tr><tr><td>Plats à fond en verre</td><td>MatTek</td><td>P35G-0-10-C</td><td></td></tr><tr><td>Transjecteur d’air</td><td>Eppendorf</td><td>5246</td><td></td></tr><tr><td>Micro-forge</td><td>Narishige</td><td>MF-900</td><td></td></tr><tr><td>Microgrinder</td><td>Narishige</td><td>EG-44</td><td></td></tr><tr><td>Micromanipulateur (pour injection)</td><td>Narishige</td><td>MN-151</td><td></td></tr><tr><td>Micromanipulateur (pour la transplantation cellulaire)</td><td>Leica</td><td>Leica Micromanipulateur</td><td></td></tr><tr><td>Hammilton Seringue</td><td>Narishige</td><td>IM-9B</td><td></td></tr><tr><td>Extracteur de micropipettes</td><td>David Kopf Instruments</td><td>Modèle 720</td><td></td></tr><tr><td>Moule de transplantation</td><td>Outils scientifiques adapatifs</td><td>PT-1</td><td></td></tr><tr><td>Porte-aiguille</td><td>Narishige</td><td>HI-7</td><td></td></tr><tr><td>Raccord de tube</td><td>Narishige</td><td>CI-1</td><td></td></tr><tr><td>Tube PTFE</td><td>Narishige</td><td>CT-1</td><td></td></tr></tbody></table>

en cours d&#39;analyse<em&gt; in vivo</em&gt; migration cellulaire en utilisant transplantations cellulaires et imagerie time-lapse en zebrafish embryons

Analyzing In Vivo Cell Migration using Cell Transplantations and Time-lapse Imaging in Zebrafish Embryos

La migration cellulaire est la clé de nombreuses conditions physiologiques et pathologiques, y compris les métastases cancéreuses. Les bases cellulaires et moléculaires de la migration cellulaire ont été analysées de manière approfondie in vitro. Cependant, la migration cellulaire in vivo diffère d’une manière ou d’une autre de la migration in vitro et s’est avérée plus difficile à analyser, étant moins accessible à l’observation directe et à la manipulation. Ce protocole utilise la migration de la plaque préchordale prospective dans l’embryon précoce de poisson-zèbre comme système modèle pour étudier la fonction des gènes candidats dans la migration cellulaire. Les progéniteurs de la plaque préchordale forment un groupe de cellules qui, lors de la gastrulation, subit une migration dirigée de l’organisateur embryonnaire au pôle animal de l’embryon. Le protocole proposé utilise la transplantation cellulaire pour créer des embryons en mosaïque. Cela offre les avantages combinés du marquage des cellules isolées, qui est la clé d’une bonne imagerie, et de la limitation des effets de gain/perte de fonction aux cellules observées, assurant ainsi des effets autonomes des cellules. Nous décrivons ici comment nous avons évalué la fonction du composant TORC2 Sin1 dans la migration cellulaire, mais le protocole peut être utilisé pour analyser la fonction de tout gène candidat dans le contrôle de la migration cellulaire in vivo.

La technique présentée a été utilisé pour analyser le rôle des sin1, l&#39; une des composantes essentielles de la Tor complexe 2 (TORC2), dans le contrôle de la migration cellulaire in vivo. L&#39;utilisation de la transplantation de cellules permet de marquage des cellules et l&#39;analyse des effets sur les cellules autonomes isolées. Film S1 montre la migration des cellules progénitrices de la plaque préchordale transplantées. étiquetage actine avec ABP140 permet la...

Combinant des approches de transplantation cellulaire, de marquage cytosquelettique et de perte/gain de fonction, ce protocole décrit comment la plaque préchordale prospective du poisson-zèbre en migration peut être utilisée pour analyser la fonction d’un gène candidat dans la migration cellulaire in vivo.

en cours d&#39;analyse<em&gt; In Vivo</em&gt; Migration cellulaire en utilisant Transplantations cellulaires et imagerie time-lapse en Zebrafish Embryons

Cell migration is key to many physiological and pathological conditions, including cancer metastasis. The cellular and molecular bases of cell migration ...

L'objectif général de cette procédure est d'analyser la fonction d'un gène candidat dans le contrôle de la migration cellulaire in vivo à l'aide d'une transplantation cellulaire combinée à un imagerie en direct dans l'embryon de poisson zèbre. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine de la migration cellulaire, telles que la détermination du rôle et de l'importance de nouveaux gènes candidats dans la migration cellulaire in vivo. Le principal avantage de cette technique est qu'elle permet de créer des embryons en mosaïque, ce qui facilite une bonne imagerie et l'adénomyose cellulaire.Pour préparer les aiguilles de transplantation cellulaire, utilisez un tireur de micropipettes afin de tirer un capillaire en verre. Ensuite, à l’aide d’un micro-foreur, coupez l’extrémité de l’aiguille au point où le diamètre intérieur mesure 35 micromètres. À l’aide d’un microbroyeur, affûtez l’extrémité coupée du capillaire selon un angle de 45 degrés.Pour éliminer les résidus de verre, insérez l'aiguille dans un support d'aiguille monté sur une seringue, puis rincez l'intérieur de l'aiguille trois fois avec de l'acide fluorhydrique à 2 % en aspirant la solution entrant et sortant. Rincez ensuite l'aiguille avec de l'acétone trois fois. Pour préparer les boîtes destinées à l'injection ou à la transplantation cellulaire, préparez un agarose à 1 % en chauffant 50 millilitres de milieu pour embryon contenant 0,5 gramme d'agarose au micro-ondes pendant une minute à pleine puissance.Refroidir le gel d'agarose à environ 60 degrés Celsius et verser tout le volume dans une boîte de Pétri de 90 millimètres. Insérer un moule pour créer des lignes d'injection ou des puits pour la transplantation cellulaire. Une fois le gel d'agarose solidifié, utiliser une pince pour retirer le moule.Pour injecter les embryons donneurs, utilisez sous un microscope stéréoscopique une pince pour comprimer délicatement les embryons transgéniques prélevés dans les sillons d'une boîte d'injection remplie de milieu pour embryons. Orientez à l’aide de la pince les embryons de manière à ce que les cellules soient dirigées vers le haut, puis incubez la boîte à 28 degrés Celsius jusqu’à ce que les embryons atteignent le stade à quatre cellules. Ensuite, chargez une pipette d'injection avec deux microlitres d'une solution d'injection préparée au préalable, contenant le domaine de liaison à l'actine de la protéine 140 de liaison à l'actine de levure liée à la mcherry.Insérez ensuite l'aiguille dans un porte-aiguille fixé à un micromanipulateur et relié à un injecteur pneumatique. Ouvrez l'aiguille en touchant délicatement la pointe de l'aiguille avec une pince fine ou en pinçant son extrémité. Insérez ensuite l'aiguille dans l'une des quatre cellules et injectez la solution afin de remplir 70 % du volume cellulaire.Injectez 30 embryons de manière similaire. Lorsque les embryons ont atteint le stade de sphère, utilisez une pipette Pasteur en plastique pour transférer les embryons transgéniques hôtes goosecoid GFP et les embryons donneurs précédemment injectés dans des boîtes de Pétri séparées de 35 millimètres, recouvertes d’un millimètre d’agarose dans du milieu embryonnaire et remplies de milieu embryonnaire contenant Pen/Strep. À l’aide de fines pinces, extrayez manuellement les embryons de leurs choriions.Ensuite, placer les embryons dans l'incubateur à 28 degrés Celsius. Lorsque les embryons ont atteint le stade bouclier au microscope fluorescent, sélectionner les embryons donneurs exprimant ABP140 mcherry à l'intérieur du bouclier vert. À l'aide d'une pipette Pasteur polie à la flamme, transférer les embryons hôtes dans une rangée de puits de la boîte de transplantation cellulaire remplie de milieu EM contenant du Pen/Strep. Puis placer les embryons donneurs dans la rangée voisine.Ensuite, à l’aide d’un cil, orientez soigneusement les embryons avec le bouclier vers le haut. Puis, à l’aide d’un porte-aiguille fixé à une seringue, rincez la pointe de l’aiguille en aspirant et en expulsant de l’éthanol à 70 %. Séchez l’aiguille en aspirant de l’air à l’intérieur.Lorsque l'aiguille est sèche, insérez-la dans le porte-aiguille relié à la seringue Hamilton, avec le tranchant orienté vers le haut. Pour effectuer une transplantation de bouclier à bouclier, introduisez l'aiguille de transplantation dans le bouclier d'un embryon donneur et aspirez environ 10 à 20 cellules marquées avec ABP140 mcherry. Veillez soigneusement à ne pas aspirer de vitellus.Transplanter les cellules dans le bouclier de l'embryon hôte et répéter le transfert de cellules jusqu'à ce que tous les embryons hôtes aient été transplantés. Une fois la transplantation terminée, utiliser une pipette Pasteur polie à la flamme pour éliminer les embryons endommagés. Incuber les embryons transplantés à 28 degrés Celsius pendant environ 30 minutes afin de leur permettre de se rétablir.Pour transplanter des cellules uniques précurseurs de la plaque préchordale après avoir déchorioné les embryons comme démontré précédemment, utilisez une pipette Pasteur polie à la flamme pour transférer trois embryons donneurs dans une boîte de transplantation cellulaire remplie de Ringer sans calcium contenant du Pen/Strep. Pour chaque embryon, disséquez à l’aide de fines pinces un explant contenant les cellules marquées par ABP140 mCherry et jetez rapidement le reste de l’embryon. À l’aide d’un cil, remuez doucement les explants jusqu’à ce que les cellules se dissocient.Ensuite, aspirez une cellule unique et isolée dans l'aiguille de transplantation et greffez-la dans le bouclier d'un embryon hôte comme cela a été démontré précédemment dans la vidéo. Pour un contrôle optimal de l'aspiration et de la transplantation, maintenez la séparation air/eau à environ 20 centimètres de l'extrémité de l'aiguille. Pour monter les embryons, remplissez un flacon à fond en verre avec un millimètre d'agarose chaude à 0,2 % dans du milieu EM. Placez le flacon à 42 degrés Celsius dans un bloc chauffant.Transférez un embryon sélectionné dans la solution d'agarose et jetez le milieu excédentaire d'embryon présent dans la pipette. Aspirez ensuite l'embryon dans la pipette contenant l'agarose et transférez-le dans une chambre d'observation préparée au préalable, accompagné d'une goutte d'agarose. Avant que l'agarose ne durcisse, utilisez un cil pour orienter l'embryon en plaçant la plaque préchordale prospective vers le haut lors de l'observation avec un microscope droit, ou contre le fond en verre pour l'observation avec un microscope inversé.Il y aura environ 40 secondes pour orienter l'embryon avant que le gel d'agarose ne durcisse, selon la température ambiante. Orientez rapidement l'embryon en manipulant le blastoderme plutôt que le vitellus, qui est très fragile. Une fois tous les embryons montés et le gel d'agarose solidifié, utilisez du milieu EM contenant du Pen/Strep pour remplir la chambre afin d'éviter que les embryons ne s'assèchent.Réalisez l'imagerie de cellules vivantes et les expériences de dynamique cellulaire conformément au protocole décrit. La technique illustrée dans cette vidéo a été utilisée pour analyser le rôle de Sin1, l'une des composantes fondamentales du complexe TOR deux, dans le contrôle de la migration cellulaire in vivo. Ce film montre la migration de cellules précurseurs de la plaque préchordale transplantées.L'étiquetage de l'actine permet de visualiser les prolongements cytoplasmiques riches en actine. L'analyse de la fréquence et de l'orientation a révélé que les cellules de type sauvage produisent fréquemment de grands prolongements cytoplasmiques orientés vers le pôle animal et dans la direction de la migration. Comme illustré sur cette figure, la perte de fonction de Sin1 entraîne une réduction drastique du nombre de prolongements ainsi qu'une randomisation des prolongements restants, démontrant l'importance de Sin1 dans le contrôle de la formation des prolongements riches en actine.Il est intéressant de noter que le phénotype Sin1 peut être corrigé par l'expression d'une forme constitutivement active de Rac1, ce qui suggère fortement que le complexe TOR C2 contrôle la dynamique de l'actine et la formation des protrusions cellulaires via Rac1. Cette technique a également été utilisée pour analyser le rôle de l'arpine, un inhibiteur du complexe ARP2/3, dans la migration cellulaire. Comme illustré ici, la perte de fonction de l'arpine conduit à une augmentation de la fréquence des protrusions, soit en raison d'une formation plus fréquente de protrusions, soit en raison d'une augmentation de la stabilité des protrusions.La mesure de la durée de vie des protrusions en l'absence d'arpine a révélé que la persistance temporelle des protrusions doublait, indiquant une augmentation de la stabilité. Une fois maîtrisée, la transplantation d'environ 30 embryons peut être réalisée en 45 minutes. Lors de la réalisation de cette procédure, il est important de surveiller attentivement le développement des embryons, car toutes les étapes sont critiques en termes de chronométrage.Après avoir suivi cette procédure, d'autres méthodes telles que la microscopie confocale en temps réel peuvent être réalisées afin d'obtenir de meilleures images et de répondre à des questions concernant l'organisation subcellulaire des éléments du cytosquelette, des marqueurs de polarité, des protéines d'appoint ou de tout autre constituant cellulaire. Après avoir visionné cette vidéo, vous devriez bien comprendre comment utiliser des greffes de précurseurs de la plaque préchordale pour analyser le rôle de tout gène candidat dans la migration cellulaire in vivo.

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Zebrafish transplantation de cellules permet la combinaison de la génétique et l'embryologie de générer des chimères tissulaires spécifiques. Cette vidéo montre gastrula scène transplantations de cellules qui ont permis à notre laboratoire pour étudier les rôles des populations astrogliales et les indices des directives précises lors de la formation commissure dans le prosencéphale.

Tissu ciblé chimères embryonnaires: Zebrafish cellulaire Gastrula transplantation

Ce protocole décrit l'imagerie des neurones individuels ou des cellules de la crête neurale dans la vie des embryons de poisson zèbre. Cette méthode est utilisée pour examiner les comportements cellulaires actine et la localisation utilisant la fluorescence confocale time-lapse microscopie.

Imagerie en temps réel de la motilité cellulaire et cytosquelette d&#39;actine des neurones individuels et de la crête neurale dans les embryons de poissons zèbres

Cette vidéo décrit une méthode de micro-injection pour l’administration de cellules cancéreuses du sein dans l’espace périvitellin d’embryons de poisson-zèbre transgénique. Après l’incubation, nous visualisons l’embryon au microscope fluorescent pour observer l’invasion, la dissémination et les métastases des cellules cancéreuses.

zPDX-Analyse de l’invasivité : étude du comportement invasif des cellules cancéreuses métastatiques dans les xénogreffes d’embryons de poisson-zèbre

Source : Williams, A. L., et al. Imagerie multi-photonique Time Lapse pour visualiser le développement en temps réel : visualisation des cellules de la crête neurale en migration dans les embryons de poisson-zèbre. J. Vis. Exp. (2017)Cette vidéo présente un protocole d’imagerie time-lapse multiphotonique permettant de visualiser la migration des cellules de la crête neurale dans un embryon de poisson-zèbre en temps réel avec une haute résolution.

Visualisation de la migration des cellules de la crête neurale dans un embryon de poisson-zèbre à l’aide de l’imagerie multiphotonique en accéléré

La mitose est essentielle à tout organisme vivant et les défauts entraînent souvent le cancer et des troubles du développement. En utilisant ce protocole d’imagerie et le poisson-zèbre comme système modèle, les chercheurs peuvent visualiser la mitose dans un organisme vertébré vivant et la multitude de défauts qui se produisent lorsque les processus mitotiques sont défectueux.

Observer Division et dynamique mitotique dans un embryon de poisson zèbre en direct

Nous décrivons ici les modèles de xénogreffes de poisson zèbre en utilisant deux sites d'injection différents, à savoir, l' espace périvitelline et canal de Cuvier, pour étudier le comportement invasif et d'évaluer le potentiel de intravasculaire et extravasation des cellules cancéreuses du sein humain, respectivement.

Comportement invasif des cellules cancéreuses du sein humain dans Embryonic Zebrafish

Suivi en direct des progéniteurs rétiniens WT individuels dans des contextes génétiques distincts permet l'évaluation de la contribution de la signalisation non-autonome cellule pendant la neurogenèse. Ici, une combinaison de knock - down de gènes, la génération par la transplantation d' embryons chimères et in vivo d' imagerie confocale time-lapse a été utilisé à cette fin.

Imagerie in vivo de Transgenic Gene Expression en Retinal individuelle progéniteurs dans chimériques Zebrafish Embryons à étudier cellulaires Influences non autonomes

Une combinaison des techniques optiques avancées de lecture avec excitation de fluorescence multi-photons longue longueur d’onde de laser a été mis en œuvre pour capturer l’imagerie haute résolution, en trois dimensions, en temps réel de la migration de la crête neurale en Tg (sox10:EGFP) et les embryons de poissons zèbres Tg (foxd3:GFP).

Multiphotonique Time Lapse imagerie de visualiser le développement en temps réel : visualisation de la migration des cellules neurales de crête dans des embryons de poisson-zèbre

Nous décrivons un protocole de xénotransplantation dans le jaune d’embryons de poisson-zèbre transparent qui est optimisé par une méthode de stadification simple et rapide. Les analyses post-injection comprennent la survie et l’évaluation de la charge de morbidité des cellules xénotransplantées par cytométrie en flux.

Une méthode simple, rapide et efficace pour l’analyse de la xénotransplantation tumorale dans les embryons de poisson-zèbre transparent

Nous faisons la démonstration d’une méthode qui tire parti de la microscopie confocale à balayage rapide pour effectuer une imagerie en direct des cellules microgliales dans le tectum optique du poisson-zèbre en développement, permettant ainsi l’analyse de la dynamique de ces cellules in vivo.

Imagerie en direct et caractérisation de la dynamique de la microglie chez l’embryon de poisson-zèbre

Nous présentons ici un protocole de transplantation de cellules à haute résolution spatiale et temporelle chez des embryons et des larves de poisson-zèbre à n’importe quel stade entre au moins 1 et 7 jours après la fécondation.

Transplantation cellulaire à haute résolution chez le poisson-zèbre embryonnaire et larvaire

Découvrez l'analyse de la migration cellulaire in vivo par transplantation cellulaire et imagerie en temps réel chez l'embryon de zèbre Danio rerio. Cette méthode permet d'étudier le rôle des gènes candidats dans la biologie du développement.

en cours danalyse In Vivo Migration cellulaire en utilisant Transplantations cellulaires et imagerie time-lapse en Zebrafish Embryons (Vidéo) | JoVE Journal

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