Imagerie tridimensionnelle d’astrocytes immunomarqués à l’aide de la microscopie confocale

Prenez une section de cerveau de souris immunomarquée avec des astrocytes marqués par fluorescence. Le cytoplasme de l’astrocyte devient fluorescent en rouge, tandis que le noyau est fluorescent en bleu.

Placez la lame sur la platine d’un microscope confocal sous une lentille d’objectif appropriée.

À l’aide du logiciel d’acquisition, ajustez la mise au point et sélectionnez les fluorophores marquant le cytoplasme de l’astrocyte et le noyau.

Commencez l’imagerie en direct et optimisez les paramètres d’imagerie pour réduire le bruit dans l’image acquise.

Sous Paramètres d’acquisition, sélectionnez un mode de balayage à basse vitesse pour capturer une image bidimensionnelle de meilleure qualité.

Identifiez la position supérieure de l’astrocyte comme point de départ de la pile Z et la position la plus basse comme point d’extrémité.

Définissez le nombre de tranches couvrant toute la profondeur de la cellule.

Fusionnez les tranches pour générer une image tridimensionnelle de l’astrocyte.

Pour commencer la microscopie confocale, placez une lame sur la platine du microscope et sélectionnez l’objectif 63x. Après avoir ouvert le logiciel d’acquisition, cliquez sur Smart Setup dans l’onglet Acquisit