Name: Isolement primaire microglies de cultures mixtes de cellules gliales de tissus de cerveau de rat nouveau-né (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-08-15T12:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 20 s
Description: Apprenez à isoler des microglies primaires à partir de cerveaux de rats nouveau-nés par culture gliale mixte et agitation mécanique. Cette méthode offre une haute pureté cellulaire pour étudier les fonctions microgliales in vitro.

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1. Dissection des tissus de cerveau de rat nouveau-né <ol><li> Refroidissement Leibovitz L-15 milieux conditionnés (Leibowitz L-15 + 0,1% de BSA + Pen 1% / Strep) à 4 ° C. Milieux de culture chaudes (DMEM + 10% de FBS + 1% de pénicilline / streptomycine) à 37 ° C. Préparer 4 60x15 mm boîtes de Pétri avec 4-5 ml de L-15 climatisées médias sur la glace. Stériliser tous les instruments chirurgicaux avec de l&#39;éthanol 100%. </li><li> Rincer les chiots nouveau-nés P2 rap avec de l&#39;éthanol 70%. (Ratons nouveau-nés âgés de P1 à P5 peut être utilisé dans ce protocole.) </li><li> Rapidement décapiter un raton avec des ciseaux bien aiguisés stériles et déposer la tête immédiatement dans l&#39;éthanol à 70%. Répétez l&#39;opération pour un total de 5 ratons ensuite transférer la tête dans une solution saline. </li><li> Retirez les cerveaux entiers de la tête et les placer dans une boîte de Pétri avec 4 - 5 ml solution L-15 (Leibowitz L-15 + 0,1% de BSA + 1% Pen / Strep) sur la glace. </li><li> Répéter les procédures 1.2 - 1.4 pour les chiots qui restent dans la litière. </li><li> Retirez les méninges du cerveau et de transférer le destissu cérébral IRED (c.-à-cortex, le cervelet, le cerveau entier, etc) dans un nouveau plat de Pétri avec 4-5 ml de solution de L-15 (Leibowitz L-15 + 0,1% de BSA + Pen 1% / Strep) sur la glace. </li></ol> 2. Préparation de la population de cellules gliales mixte <ol><li> Sans endommager le tissu cérébral avec des ciseaux ou une lame, transférer le tissu avec une pipette de 10 ml à 50 ml une stérile tube conique. </li><li> Centrifuger conique à 2500 RCF pendant 5 min à 4 ° C. </li><li> Aspirer le surnageant. Ajouter 4-5 ml de frais L-15 médias (Leibowitz L-15 + 0,1% + 1% BSA Pen / Strep). </li><li> Introduire à la pipette des tissus de haut en bas 10 fois avec une pipette stérile de 10 ml. </li><li> Placer un tamis cellulaire (100 pores um) sur un nouveau tube de 50 ml conique. Tissus pipette de haut en bas une fois avec une solution stérile de pipette 5 ml et que la pipette au ras de la crépine cellule, distribuer le matériau à travers la crépine cellule dans le tube conique. </li><li> Rincer la crépine cellule avec 4-5 ml de frais L-15 médias (Leibowitz L-15 + 0,1% BSUn stylo + 1% / Strep). </li><li> Centrifuger conique avec des cellules tendues à 2500 RCF pendant 5 min à 4 ° C. </li></ol> 3. Placage et d&#39;entretien des cultures mixtes de cellules gliales <ol><li> Pour chaque cerveau de rat nouveau-nés traités, préparer 1 T-75 stériles flacon en ajoutant 12 ml de milieux de culture (DMEM + 10% de FBS + 1% de pénicilline / streptomycine) dans chaque flacon. </li><li> Aspirer le surnageant des cellules granulées et ajouter 5-6 ml de milieux de culture pour le culot cellulaire. Introduire à la pipette de haut en bas 10 fois avec une pipette de 10 ml. </li><li> Transférer un volume égal de suspension cellulaire dans chaque fiole T-75. </li><li> Incuber fioles dans un 5% de CO 2 incubateur à 37 ° C pour un total de 1-3 semaines. </li><li> Flacons devrait d&#39;abord être incubées pendant 5 jours, et le cinquième jour, remplacer les milieux de culture dans chaque flacon avec 12 ml de milieu frais et retourner à l&#39;incubateur. Puis, tous les 3 jours, remplacer les milieux conditionnés dans chaque flacon avec 12 ml de milieu frais pour atteindre la confluence. Ce doit être le fairene très attentivement sans toucher le fond des flacons où les cellules se fixent. </li></ol> 4. Isolement et Revêtement de l&#39;enseignement primaire microglies <ol><li> Après mixtes cultures gliales sont complètement confluentes, retirez flacons de l&#39;incubateur et les caches flacon avec du parafilm pour éviter les échanges gazeux avec l&#39;air ambiant. </li><li> Agiter flacons à 100 RPS (Companion Lab SI-600, JEIO Tech) pendant 1 heure à 37 ° C. </li><li> Recueillir les médias de tous les flacons avec une pipette de 10 ml, sans perturber la couche d&#39;astrocytes à la surface ballon. Placez le support dans des tubes de 50 ml coniques. Ajouter des milieux frais aux flacons et bouteilles de retour à l&#39;incubateur. </li><li> Centrifuger les tubes coniques à 2500 RCF pendant 5 min à 4 ° C. </li><li> Aspirer surnageant de tous les tubes coniques. Les culots cellulaires sont élevés cellules de la microglie de pureté. Pellets Remettre en suspension dans 1 ml de placage microglie médias (DMEM + FES 10% + 1% de pénicilline / streptomycine). </li><li> Comptez la densité cellulaire dans les médias remises en suspension à l&#39;aideun hémocytomètre. </li><li> Ajouter un volume approprié de géloses microglies pour atteindre un 2 x 10E5 cellules par ml de densité. Plate comme il convient pour l&#39;analyse expérimentale. </li><li> Autoriser les microglies pour attacher la nuit. </li></ol> 5. Les résultats représentatifs Le protocole décrit ci-dessus les résultats dans les cultures primaires de haute pureté microglie. Comme déterminé par immunohistochimie pour un marqueur cellulaire de macrophages / microglies spécifique (Iba1), plaqués cultures microglies sont&gt; à 90% (figure 2). En outre, la coloration des marqueurs de cellules astrocytes, oligodendrocytes et des neurones spécifiques démontre une contamination minimale (figure 2). Après avoir établi mixtes cultures de cellules gliales, la microglie peut être isolé en secouant jusqu&#39;à 4 fois successives. L&#39;isolement initial microglie donnera environ 2,2 x 106 cellules / ml ou environ 9 millions de cellules par 10 flacons et le rendement attendu diminue à chaque sha successifske. La microglie isolés par cette méthode ont été utilisées avec succès pour étudier la capacité de phagocytose, la fonction, comme la production d&#39;oxyde nitrique, et la toxicité neuronale (Figure 3) 13-14. <img alt="Figure 1" src="/files/ftp_upload/3814/3814fig1.jpg" /> Figure 1. Vue d&#39;ensemble du protocole de préparation de cultures mixtes de cellules gliales et l&#39;isolement de la microglie primaire. <img alt="Figure 2" src="/files/ftp_upload/3814/3814fig2.jpg" /> Figure 2. Isolement de la microglie de haute pureté tel que vérifié par une analyse immunohistochimique utilisant la microglie (Iba-1, rouge), des astrocytes (GFAP, vert), neurone (NeuN, rouge) et des oligodendrocytes (CC1, rouge) des marqueurs spécifiques. La coloration de l&#39;ADN des cellules en culture par DAPI (en bleu) est également indiquée. <img alt="Figure 3" src="/files/ftp_upload/3814/3814fig3.jpg" /> Figure 3. Microglie isolés dans la descri méthodelit ont été utilisées dans un certain nombre de tests, y compris, mais sans s&#39;y limiter, les dosages, les dosages de la fonction de phagocytose et des études de neurotoxicité. Dans ces études, nous avons constaté que la microglie (Iba-1 positive, vert), lorsqu&#39;ils sont exposés à contrôler (A) ou LPS (B) des médias traités, augmenter leur phagocytose de billes de latex marquées par fluorescence (rouge), qui peuvent être quantifiées ( C). En outre, le LPS (1ng/ml) le traitement peut augmenter la production d&#39;oxyde nitrique dans la microglie (D). Enfin, via à la fois transwell insert-séparés ou directs microglie-neurones cultures, nous avons constaté que les microglies incubées avec LPS peuvent induire la mort des cellules neuronales, telle que mesurée par la lactate déshydrogénase (LDH) de libération (E, F).

<ol><li>Ransohoff, R. M., Perry, V. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglial+physiology%3A+unique+stimuli%2C+specialized+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Microglial physiology: unique stimuli, specialized responses.</a> Annu. Rev. Immunol. 27, 119-145 (2009).</li>
<li>Raivich, G., Bohatschek, M., Kloss, C. U., Werner, A., Jones, L. L., Kreutzberg, G. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroglial+activation+repertoire+in+the+injured+brain%3A+graded+response%2C+molecular+mechanisms+and+cues+to+physiological+function%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res.+Brain+Res.+Rev%22%5BJournal%5D)">Neuroglial activation repertoire in the injured brain: graded response, molecular mechanisms and cues to physiological function.</a> Brain Res. Brain Res. Rev. 30, 77-105 (1999).</li>
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<li>Block, M. L., Hong, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+microglial+activation+and+progressive+dopaminergic+neurotoxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem.+Soc.+Trans%22%5BJournal%5D)">Chronic microglial activation and progressive dopaminergic neurotoxicity.</a> Biochem. Soc. Trans. 35, 1127-1132 (2007).</li>
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<li>Hassan, N. F., Campbell, D. E., Rifat, S., Douglas, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+characterization+of+human+fetal+brain-derived+microglia+in+in+vitro+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Isolation and characterization of human fetal brain-derived microglia in in vitro culture.</a> Neuroscience. 41, 149-158 (1991).</li>
<li>Frank, M. G., Wieseler-Frank, J. L., Watkins, L. R., Maier, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+isolation+of+highly+enriched+and+quiescent+microglia+from+adult+rat+hippocampus%3A+immunophenotypic+and+functional+characteristics%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">Rapid isolation of highly enriched and quiescent microglia from adult rat hippocampus: immunophenotypic and functional characteristics.</a> J. Neurosci. Methods. 151, 121-130 (2006).</li>
<li>Byrnes, K. R., Stoica, B., Loane, D. J., Riccio, A., Davis, M. I., Faden, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabotropic+glutamate+receptor+5+activation+inhibits+microglial+associated+inflammation+and+neurotoxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Metabotropic glutamate receptor 5 activation inhibits microglial associated inflammation and neurotoxicity.</a> Glia. 57, 550-560 (2009).</li>
<li>Loane, D. J., Stoica, B. A., Pajoohesh-Ganji, A., Byrnes, K. R., Faden, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+metabotropic+glutamate+receptor+5+modulates+microglial+reactivity+and+neurotoxicity+by+inhibiting+NADPH+oxidase%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Activation of metabotropic glutamate receptor 5 modulates microglial reactivity and neurotoxicity by inhibiting NADPH oxidase.</a> J. Biol. Chem. 284, 15629-15639 (2009).</li>
</ol>

Pas de conflits d&#39;intérêt déclarés.

Alors que ce protocole est régulièrement utilisé pour produire la microglie pur et sain pour les expériences de recherche, un examen attentif des aspects techniques au cours de parties critiques de la procédure permettra de minimiser la variabilité dans la microglie isolée. Tout d&#39;abord, lors de la dissection du tissu cérébral de rats nouveau-nés petits, travaillant en temps opportun est nécessaire pour minimiser les dommages hypoxiques et ischémiques du tissu. Cependant, il est également important d&#39;enlever com...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nom du réactif </td><td> Entreprise </td><td> Le numéro de catalogue </td><td> Commentaires </td></tr><tr><td> 60 mm x 15 mm boîtes de Pétri </td><td> Fisher marque </td><td> 0875713A </td><td></td></tr><tr><td> De Sharp ciseaux de dissection </td><td> Outils belle science </td><td> 14094-11 </td><td></td></tr><tr><td> Dumont # 7b pince standard des conseils, des courbes, 11cm </td><td> Outils belle science </td><td> 11270-20 </td><td></td></tr><tr><td> Dumont # 5 pince standard des conseils, des droites, 11 cm </td><td> Outils belle science </td><td> 11251-10 </td><td></td></tr><tr><td> Tubes de 50 ml à centrifuger coniques </td><td> VWR </td><td> 89039-656 </td><td></td></tr><tr><td> 5 pipettes sérologiques ml </td><td> Grenier Bio One </td><td> 606180 </td><td></td></tr><tr><td> 10 pipettes sérologiques ml </td><td> Grenier Bio One </td><td> 607180 </td><td></td></tr><tr><td> 100 um crépine stérile cellule de nylon </td><td> Faucon </td><td> 35-2360 </td><td></td></tr><tr><td> 75 cm 2 flacons de culture tissulaire </td><td> Corning </td><td> 430641 </td><td></td></tr><tr><td> Dulbecco milieu essentiel minimal (DMEM) </td><td> Gibco (Invitrogen) </td><td> 31053-028 </td><td></td></tr><tr><td> Leibovitz milieu L-15 </td><td> Gibco (Invitrogen) </td><td> 11415064 </td><td></td></tr><tr><td> Sérum de veau fœtal </td><td> Gibco (Invitrogen) </td><td> 16000-036 </td><td></td></tr><tr><td> Fœtale sérum équin </td><td> Pêcheur </td><td> SH3007402 </td><td></td></tr><tr><td> La pénicilline-streptomycine </td><td> Gibco (Invitrogen) </td><td> 15140163 </td><td></td></tr><tr><td> L&#39;éthanol à 100% </td><td> La Société Warner Graham </td><td> 64-17-5 </td><td></td></tr><tr><td> Phosphate solution saline tamponnée, 10X, pH 7,4 </td><td> Qualité biologique, inc. </td><td> 119-069-131 </td><td> 1X dans l&#39;eau distillée stérile </td></tr><tr><td> Sacs de Biohazard </td><td> VWR </td><td> 14220-028 </td><td></td></tr><tr><td> Hémocytomètre </td><td> Hausser scientifique </td><td> 1492 </td><td></td></tr><tr><td> Des plaques 6 puits culture cellulaire avec une surface CellBIND </td><td> Corning </td><td> 3335 </td><td></td></tr></tbody></table>

isolement primaire microglies de cultures mixtes de cellules gliales de tissus de cerveau de rat nouveau-né

Primary Microglia Isolation from Mixed Glial Cell Cultures of Neonatal Rat Brain Tissue

Les microglies représentent environ 12 % de la population cellulaire totale dans le cerveau des mammifères. Bien que les neurones et les astrocytes soient considérés comme les principaux types cellulaires du système nerveux, les microglies jouent un rôle important dans la physiologie normale du cerveau en surveillant les débris et les agents pathogènes présents dans les tissus et en maintenant l'homéostasie du parenchyme par une activité phagocytaire 1,2. Les microglies sont activées dans diverses conditions de lésion et de maladie, notamment les maladies neurodégénératives, les traumatismes crâniens et les infections du système nerveux 3. Dans ces conditions d'activation, les microglies augmentent leur activité phagocytaire, subissent des changements morphologiques et prolifératifs, et sécrètent activement des espèces réactives de l'oxygène et de l'azote, des chimiokines et des cytokines pro-inflammatoires, activant souvent une boucle paracrine ou autocrine 4-6. Étant donné que ces réponses microgliales contribuent à la pathogenèse des affections neurologiques, des recherches centrées sur les microglies sont justifiées.
	En raison de l'hétérogénéité cellulaire du cerveau, il est techniquement difficile d'obtenir, lors d'expériences in vivo, une quantité suffisante d'échantillons de microglie avec une haute pureté. Les recherches actuelles sur les fonctions neuroprotectrices et neurotoxiques des microglies nécessitent une méthode technique standardisée permettant de produire de manière reproductible des microglies pures et saines, en quantité suffisante pour l'étude. Nous présentons, sous forme de texte et de vidéo, un protocole d'isolement de microglies primaires pures à partir de cultures mixtes de glie, destiné à diverses applications en aval. Brièvement, cette technique utilise des tissus cérébraux dissociés provenant de ratons néonatals afin de produire des cultures cellulaires gliales mixtes. Une fois les cultures gliales mixtes devenues confluentes, les microglies primaires sont isolées mécaniquement par une courte agitation de la culture. Les microglies sont ensuite mises en culture avec une haute pureté pour des études expérimentales.
	Le principe et le protocole de cette méthode ont été décrits dans la littérature 7,8. Par ailleurs, d'autres méthodes pour isoler les microglies primaires sont bien documentées 9-12. Le tissu cérébral homogénéisé peut être séparé par une centrifugation en gradient de densité afin d'obtenir des microglies primaires 12. Toutefois, cette centrifugation, d'une durée modérée (45 min), peut provoquer des dommages cellulaires et une activation, ainsi qu'une enrichment en microglies et en autres populations cellulaires. Un autre protocole a été utilisé pour isoler des microglies primaires chez divers organismes, par agitation prolongée (16 h) en culture 9-11. Après agitation, le surnageant du milieu est centrifugé pour isoler les microglies. Cette méthode d'isolement en deux étapes, plus longue, peut également perturber la fonction et l'activation des microglies. Nous utilisons principalement le protocole d'isolement des microglies suivant dans notre laboratoire pour plusieurs raisons : (1) les microglies primaires reproduisent la biologie in vivo plus fidèlement que les lignées cellulaires de microglies de rongeurs immortalisées, (2) une perturbation mécanique minimale réduit au minimum les risques de dysfonctionnement ou d'activation cellulaires, et (3) un rendement suffisant peut être obtenu sans passage des cultures mixtes de cellules gliales.
	Il est important de noter que ce protocole utilise des tissus cérébraux de rats nouveau-nés pour isoler les microglies, et que l'utilisation de rats plus âgés pour l'isolement des microglies peut influencer significativement le rendement, l'état d'activation et les propriétés fonctionnelles des microglies isolées. Des données montrent que le vieillissement est associé à un dysfonctionnement des microglies, à une neuroinflammation accrue et à des pathologies neurodégénératives ; c'est pourquoi des études antérieures ont utilisé des microglies adultes ex vivo afin de mieux comprendre le rôle des microglies dans les maladies neurodégénératives où le vieillissement constitue un paramètre important. Toutefois, les microglies ex vivo ne peuvent pas être maintenues en culture pendant de longues périodes. Par conséquent, bien que ce protocole prolonge la survie des microglies primaires en culture, il convient de noter que ces microglies présentent un comportement différent de celui des microglies adultes, et que les études in vitro doivent être soigneusement interprétées lorsqu'elles sont transposées à un contexte in vivo.

Isoler les microglies primaire à partir de l&#39;hétérogénéité cellulaire du cerveau est essentielle pour enquêter sur leur rôle dans les deux conditions physiologiques et pathologiques. Ce protocole décrit une isolation mécanique et technique mixte de culture cellulaire qui fournit un rendement élevé et de haute pureté, viables primaires pour les cellules microgliales<em&gt; In vitro</em&gt; Étude et les applications en aval.

Isolement primaire microglies de cultures mixtes de cellules gliales de tissus de cerveau de rat nouveau-né

Les microglies représentent environ 12 % de la population cellulaire totale du cerveau des mammifères. Alors que les neurones et les astrocytes sont considérés comme les principaux...

L'objectif général de cette procédure est de préparer des cultures primaires de cellules microgliales à partir de cerveaux de rats néonatals. Cela est réalisé en isolant d'abord le cerveau et en retirant les méninges. La deuxième étape consiste à homogénéiser le cerveau et à ensemencer la culture gliale mixte dans des flacons T75.Ensuite, les flacons sont incubés pendant 10 à 14 jours jusqu'à ce qu'une monocouche d'astrocytes atteigne la confluence. La dernière étape consiste à agiter les flacons afin de libérer les microglies qui se développent au-dessus de la monocouche d'astrocytes, ce qui donne une culture purifiée de microglies. En définitive, des microglies primaires de haute pureté peuvent être utilisées dans des essais ultérieurs de culture cellulaire unique in vitro et de coculture.L'avantage principal de cette technique par rapport aux méthodes existantes, comme la méthode de gradient de Perico, est qu'une perturbation mécanique nominale minimise le dysfonctionnement ou l'activation des microglies, et que des microglies pour des expériences peuvent être obtenues pendant plusieurs semaines après la préparation initiale. Je vais démontrer cette procédure avec Tammy Tero, ét

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Immunologie et infection

Cette vidéo présente une méthode d’isolement et de culture de microglie à partir de cerveaux de rats. Il s’agit de séparer la microglie d’autres cellules neuronales et non neuronales à l’aide de plaques recouvertes d’un anticorps monoclonal spécifique de la microglie.

Isolement et culture de la microglie à partir de cerveaux de rats à l’aide de milieux sans sérum

La vidéo a démontré la méthode d’isolement et de culture de cellules à partir du cerveau d’une souris néonatale. Il impliquait une dissociation enzymatique et mécanique du cerveau, suivie d’une culture dans un milieu de croissance dépourvu de facteur de croissance neuronale pour obtenir une population gliale mixte.

Obtention d’une culture mixte de cellules gliales à partir d’un cerveau de souris néonatale

Nous présentons des méthodes pour l'isolement / culture efficace et rapide de la microglie viable du cortex cérébral néonatal et la moelle épinière adulte. La dissection et le placage de la microglie corticale peuvent être accomplies dans les 90 minutes, avec la récolte des microglies subséquente aura lieu ~ 10 jours suivant la dissection initiale.

Microglia de culture du système nerveux central néonatale et de l&#39;adulte

Une des clés de réussite de l'enquête de la biologie de la microglie est la préservation de la microglie immunofunction ex vivo lors de l'isolement de tissu du SNC. Isoler la microglie par les résultats serrant rotatifs dans des cultures de cellules de grande pureté et immunofonctionnel évaluée par imagerie de fluorescence, immunocytochimie, et ELISA activation de la microglie suivante avec le lipopolysaccharide stimuli pro-inflammatoires (LPS) et Pam 3 CSK 4 (Pam).

Isolation des corticale microglie avec immunophénotype préservée et fonctionnalité De murins nouveau-nés

Nous présentons ici un protocole pour isoler microglies de souriceaux post - natal (jour 1) pour l' expérimentation in vitro. Cette méthode d'isolement improvisée génère à la fois un rendement et une pureté élevés, un avantage significatif par rapport aux méthodes de remplacement qui permet une expérimentation à large gamme pour les besoins de l'élucidation de la biologie de la microglie.

Rapide et raffiné CD11b Isolation magnétique de primaire microglies avec pureté améliorée et polyvalence

Efforts pour comprendre en détail le fonctionnement du microgliales ont été entravées par le manque de modèles de culture microgliales qui récapitule les propriétés des matures in vivo de cellules microgliales. Ce protocole décrit une démarche d’isolement et de la culture visant à maintenir la survie robuste des microglies rat mature très ramifié dans des conditions définies et moyen.

Isolement et Culture des microglies rongeurs pour promouvoir une dynamique ramifié morphologie dans un milieu sans sérum

Nous présentons ici un protocole pour l’isolement in vitro de plusieurs populations de cellules gliales à partir d’un SNC de souris. Cette méthode permet la ségrégation de la microglie régionale, des cellules précurseurs d’oligodendrocytes et des astrocytes pour étudier les phénotypes de chacun dans une variété de systèmes de culture.

Dissection et isolement de la glie murine de plusieurs régions du système nerveux central

Ce protocole est une méthode efficace, rentable et robuste d’isoler les microglies primaires des tissus cérébraux vivants, adultes et humains. Les microglies humains primaires isolés peuvent servir d’outil pour étudier les processus cellulaires dans l’homéostasie et la maladie.

Obtention de microglies humaines à partir de tissus cérébraux humains adultes

Les cultures primaires de microglies sont couramment utilisées pour évaluer de nouvelles molécules anti-inflammatoires. Le présent protocole décrit une méthode reproductible et pertinente pour isoler magnétiquement la microglie des nouveau-nés.

Isolement magnétique de cellules microgliales de souris nouveau-née pour des cultures de cellules primaires

Ce protocole décrit une co-culture microgliale-neuronale établie à partir de cellules neuronales primaires isolées d’embryons de souris aux jours embryonnaires 15-16 et de microglie primaire générée à partir du cerveau de souris néonatales aux jours postnatals 1er-2.

Génération et co-culture de microglie primaire murine et de neurones corticaux

Apprenez à isoler des microglies primaires à partir de cerveaux de rats nouveau-nés par culture gliale mixte et agitation mécanique. Cette méthode offre une haute pureté cellulaire pour étudier les fonctions microgliales in vitro.

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