Analyse quantitative de l'autophagie en utilisant avancée Fluorescence Microscopy 3D

L’objectif global de cette procédure est d’obtenir des images quantitatives des cellules tumorales de la prostate traitées afin de mesurer le degré et l’étendue de l’autophagie à différents points temporels. Ceci est accompli en traitant d’abord les cellules avec de l’arginine, de la dase ou d’autres réactifs expérimentaux pour induire l’autophagie et/ou la mort cellulaire. La deuxième étape consiste à décider s’il faut imager des cellules vivantes ou des cellules fixes et à préparer les échantillons en conséquence.

Ensuite, obtenez des images de fluorescence 3D de cellules vivantes ou fixes à l’aide de la microscopie à fluorescence à large champ, à déconvolution ou à éclairage structuré. La dernière étape consiste à collecter des données statistiques sur la distribution de la taille des autophagosomes et la colocalisation avec d’autres structures intracellulaires. À l’aide d’un logiciel d’analyse d’images numériques 3D, cette approche permet d’obtenir des résultats qui montrent que non seulement l’induction automatique de phages par l’arginine dase peut provoquer la mort des cellules tumorales de la prostate, mais aussi que ces cellules présentent des changements structurels morphologiquement distincts des changements associés à l’apoptose et à la nécrose.