Une méthode améliorée pour la mesure précise et rapide des performances de vol en Drosophila

L’objectif global de cette procédure est de mesurer rapidement et précisément les performances de vol chez la drosophile. Ceci est accompli en larguant d’abord des mouches dans un cylindre de vol. La deuxième étape de la procédure consiste à imager la surface d’atterrissage à l’aide d’un appareil photo numérique.

La dernière étape consiste à analyser les données à l’aide d’un logiciel d’imagerie en mesurant la hauteur d’atterrissage de chaque mouche. En fin de compte, cette procédure permet d’identifier les mutations et les conditions telles que le vieillissement ou la neurodégénérescence, qui altèrent la capacité de vol et aident à quantifier les performances de vol. Le principal avantage de cette technique par rapport aux méthodes existantes, telles que le testeur en vol d’origine, est qu’elle est plus appropriée pour les écrans à haut débit pour les mutants et d’autres conditions qui entravent le vol.

Nous avons eu l’idée de cette méthode pour la première fois lorsque nous avons réalisé combien de temps était nécessaire pour tester un grand nombre de génotypes à l’aide de l’essayeur en vol original. Fixez le cylindre de vol à un support d’anneau à l’aide de pinces à chaîne. Laissez environ trois centimètres sous le cylindre pour le passage du plat.

Chargez la gamelle d’une fine couche d’huile minérale et glissez-la sous le cylindre de vol. Fixez l’entonnoir à un deuxième support d’anneau. Ajustez la hauteur de l’entonnoir de sorte que le bas de l’entonnoir affleure le haut du cylindre de vol.

La partie la plus étroite de l’entonnoir doit être plus étroite qu’un flacon à mouches. Le diamètre du tube de descente doit être légèrement plus large qu’un flacon à mouches, de sorte que le flacon puisse tomber librement. Insérez le tube de descente dans le haut de l’entonnoir et fixez-le à l’aide d’une pince à griffes.

Ensuite, à partir d’une feuille de polyacrylamide, coupez un morceau rectangulaire de la longueur du cylindre de vol avec une largeur légèrement inférieure à la circonférence intérieure du cylindre de vol. Appliquez une fine couche d’adhésif anti-enchevêtrement sur la feuille, en laissant suffisamment d’espace en haut et en bas non enduit pour maintenir la feuille. Une fois que l’adhésif sur la feuille a séché pendant une heure, glissez la feuille dans le cylindre de vol avec l’adhésif vers l’intérieur.

Ensuite, assemblez le rail de la caméra à l’aide de supports en pin. Assurez-vous que le bas du rail peut supporter la caméra sans bloquer l’objectif. Vissez ensuite les bouchons en place de manière à ce qu’ils n’interrompent pas la vue de la caméra sur la feuille de plastique.

Prélever des flacons de mouches à tester avec un maximum de 20 mouches par flacon. Tapotez doucement les mouches sur le fond du flacon. Débranchez le flacon et insérez-le dans le tube de descente.

Relâchez le flacon. Lorsque la fiole heurte les parois de l’entonnoir qui se rétrécit, les mouches qui sont éjectées dans le cylindre de vol. Soulevez le tube de descente pour retirer le flacon vide et chargez plus de mouches si vous le souhaitez.

Jusqu’à 200 mouches chargées à partir de 10 flacons peuvent être testées et imagées facilement sur une seule feuille de polyacrylamide. Maintenant, retirez la feuille de plastique et placez-la sur Une surface blanche plane Un panneau d’affichage blanc peut être utilisé si les plans de travail sont de couleur foncée. Assemblez le rail de la caméra sur la feuille de plastique.

La caméra doit être suffisamment haute au-dessus de la feuille pour que le haut et le bas de la feuille soient dans le champ de vision. Faites glisser l’appareil photo le long de la piste tout en maintenant le bouton de capture enfoncé pour acquérir une image panoramique. Le nombre de mouches atterrissant dans l’huile dans le plat situé sous la chambre de vol peut être compté manuellement.

Pour chaque essai entre les essais, les mouches peuvent être retirées de la feuille et la feuille peut être réutilisée. Ouvrez les fichiers d’image dans le logiciel image J, recadrez les images si nécessaire pour n’inclure que la surface d’atterrissage. La zone revêtue du piège à enchevêtrement.

Convertissez les images en échelle de gris de huit bits et créez un seuil. Pour filtrer le fond blanc. Définissez les paramètres pour identifier chaque mouche.

À l’aide du menu Analyser les particules, définissez les paramètres. Utilisé pour identifier une particule à l’aide de l’appareil de démonstration. Une zone de cinq à 90 pixels carrés et une circularité de 0,4 à 1,0 permettront d’identifier avec précision tous les échantillons.

Maintenant, mesurez l’emplacement de chaque mouche à l’aide de la liste de coordonnées générée pour chaque particule. La coordonnée X en pixels peut être convertie en centimètres. Pour calculer la hauteur d’atterrissage, importez le tableau dans une feuille de calcul et procédez à l’analyse.

Les performances de vol des mouches mutantes lentes, qui ont un défaut de vol connu, ont été comparées à celles des mouches sauvages de Canton. Toutes les mouches avaient trois jours, élevées à température ambiante, les mouches se posaient constamment près du haut du cylindre. L’étendue de l’atterrissage était beaucoup plus grande pour les mutants à poussée lente.

La hauteur d’atterrissage moyenne des cantons à 73 centimètres était nettement supérieure à celle des mutants à poussée lente à 44 centimètres. À la suite de cette procédure, des méthodes supplémentaires telles que l’histologie peuvent être utilisées pour répondre à des questions supplémentaires concernant l’intégrité structurelle des muscles de vol, des motoneurones ou des jonctions neuromusculaires. Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon dont vous pouvez évaluer rapidement les performances de vol en oph.