Méthodes de dosage à Drosophila Comportement

L’objectif général de cette procédure est de démontrer des méthodes d’examen des comportements moteurs, sensoriels et de coordination de la drosophile. Ceci est accompli en évaluant d’abord la fonction motrice de la lave, en utilisant le test de rampement, en évaluant la fonction motrice adulte, en utilisant le test de l’anneau et en évaluant la coordination et les capacités sensorielles des adultes avec le test de parade nuptiale. En fin de compte, ce panel de tests comportementaux peut montrer comment des facteurs génétiques et externes tels que les traitements médicamenteux peuvent influencer l’activité et la coordination.

Intra sophala. Le principal avantage de ce test par rapport aux méthodes existantes telles que l’axe géographique négatif est que le test en anneau a un débit plus élevé et une sensibilité plus élevée. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine des maladies neurodégénératives, telles que la détection précoce des défauts de locomotive

La démonstration de ce test sera assurée par le Dr Jamie Becknell, postdoctorant dans mon laboratoire. Le crawling larvaire est utilisé pour mesurer l’effet des facteurs génétiques et environnementaux sur la motilité pour commencer à mettre en place un croisement de 10 à 15 mâles et 10 à 15 vierges dans une bouteille standard. Après 24 heures, les adultes en bonne santé auront pondu suffisamment d’œufs pour peupler la bouteille afin de maintenir cette population âgée jusqu’à 24 heures.

Débarrassez les adultes dans une bouteille fraîche et répétez le processus. Maintenant, incubez la bouteille jusqu’à ce que la troisième larve étoile soit observée dans la nourriture de la bouteille. Ajoutez 50 à 100 millilitres de 20 % de saccharose et laissez reposer pendant 20 minutes.

Les larves flotteront vers le haut, recueilleront les larves à l’aide d’une pipette sérologique de 25 millilitres avec la pointe coupée et placeront dans un panier en filet. Lavez les larves dans le panier en filet deux fois avec de l’eau déminéralisée. Ils peuvent maintenant être expérimentés.

Pour traiter les larves avec un médicament, utilisez une brosse pour transporter le nombre désiré de larves dans un bécher de cinq millilitres contenant une solution de 5 % de saccharose et le médicament d’intérêt. Laissez-les se nourrir de la solution de sucre drogué pendant 15 minutes, puis versez-les à nouveau dans le panier en filet, rincez-les et procédez à la mesure de l’effet du médicament sur la motilité. À l’aide d’une brosse, transportez une lave individuelle vers une boîte de Pétri de 15 centimètres contenant 2 % d’aros.

Placer sur une feuille de papier greffé. Collectez maintenant les données. Il suffit de compter le nombre de lignes de grille que la lave traverse en une minute.

Ensuite, utilisez la brosse pour transférer la lave dans le puits d’une boîte de dissection en verre contenant une solution de pâte de levure diluée sous un microscope de dissection sur une période d’une minute, comptez les contractions de Percys. Une seule contraction est comptée comme un mouvement complet postérieur à antérieur. Répétez l’opération jusqu’à ce que le nombre désiré de larves ait été compté.

Le protocole de l’anneau mesure la vitesse locomotrice des animaux adultes, recueille les mouches mâles adultes nouvellement émergées sous anesthésie légère et les transfère dans un fichier standard contenant de la nourriture normale ou médicamentée. Mettez environ 25 mouches par flacon. Maintenez les mouches à température ambiante pendant deux à trois jours pour une anesthésie complète, une récupération et une accumulation de niveaux de médicament à l’état stable.

Transférez ensuite environ 25 mouches sans anesthésie dans des flacons en polystyrène avec des bouchons moulés, et assemblez les flacons en un ou plusieurs appareils à anneau. Laissez les mouches se reposer pendant 15 à 20 minutes tout en alignant un appareil photo numérique pour photographier les flacons de côté, ayez une minuterie prête et réglez-la sur la durée souhaitée pour le test. Généralement trois secondes pour effectuer le test.

Tenez l’appareil à anneau dans une main sans déranger les mouches et tenez brusquement la minuterie de l’appareil photo dans l’autre main. Tapotez trois fois l’appareil sur le banc pour abattre les mouches et démarrer simultanément le compte à rebours de l’appareil photo. Répétez l’essai une fois par minute jusqu’à ce que cinq ou six essais aient été effectués.

Il est essentiel de ne pas réutiliser les flacons d’analyse en polystyrène après la collecte des données initiales. Parce que les mouches neuves placées dans les flacons usagés ne grimperont pas dans la même mesure que les mouches placées dans les flacons frais. Pour collecter les données à l’aide d’une visionneuse d’images, notez la taille moyenne, montez par les différents groupes.

Cet essai nécessite des croisements génétiques préparés dans des bouteilles qui produisent une descendance abondante pour recueillir des mouches pour l’essai. Quelques heures après l’apparition subjective de l’animal, l’aube dégage les bouteilles pour recueillir tous les adultes à des intervalles de trois à quatre heures. Collectez les mâles sexuellement naïfs nouvellement émergés et les femelles logent les mâles individuellement dans des flacons ou des tubes avec de la nourriture pour loger les femelles en groupes de cinq à six.

Dans des enclos similaires, un nombre égal de mâles et de femelles est nécessaire pour l’essai. Après avoir isolé les mouches collectées pendant cinq jours, préparez-vous à les charger dans une roue d’accouplement et à effectuer le test. Ensuite, transférez soigneusement une femelle et un mâle dans la chambre d’une roue d’accouplement sous un microscope de dissection.

Observez le couple pendant 10 minutes ou jusqu’à ce qu’ils réussissent à copuler pendant ce temps. Notez quand chacun des comportements est observé pour la première fois. Enregistrement du moment où le mâle se tourne pour la première fois vers le disque féminin.

Lorsque le mâle touche pour la première fois la femelle avec sa patte, lorsque le mâle étend et fait vibrer une aile pour la première fois, enregistre lorsque le mâle lèche pour la première fois les organes génitaux féminins. Notez quand l’homme tente pour la première fois de monter l’e-mail féminin. Enfin, notez le temps total consacré au comportement de parade nuptiale jusqu’à ce que la copulation se produise.

Pour les animaux de type sauvage, c’est presque toujours dans les cinq à 10 minutes, collectez les données par trois paramètres différents. Tout d’abord, la latence d’un comportement est le temps qu’il faut avant qu’il ne soit observé pour la première fois. Deuxièmement, la fréquence d’un comportement est de savoir s’il est observé ou non.

Et troisièmement, l’indice de parade nuptiale est le temps passé à la parade nuptiale divisé par le temps total et jusqu’à la copulation dans une expérience avec des animaux. Hébergeant des mutations dans F-U-S-T-L-S lié à une sclérose latérale myotrophique. Les mutants de gènes avec un centre d’insertion ont montré la moitié de la capacité de rampement des témoins de type sauvage et une mutation faux-sens R 5 21 C a réduit la vitesse de rampement à seulement environ un centimètre par minute.

Les tests d’anneau sur de jeunes mouches adultes de type sauvage ont donné une hauteur moyenne, grimpée entre trois et cinq centimètres sur une période de trois secondes. Dans cet essai, aucune désensibilisation n’a été observée, car jusqu’à cinq essais consécutifs espacés d’une minute lors de la tentative de l’essai en anneau. Il est important de ne pas oublier d’être aussi précis que possible en ce qui concerne le timing.

Une fois maîtrisé, l’essai d’encombrement larvaire peut être réalisé en 30 à 40 minutes pour observer 10 essais pour un génotype s’il est réalisé correctement. Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez également avoir une bonne compréhension de la façon d’observer et de noter les comportements de parade nuptiale chez la mouche.