Identification de paires Kinase-substrat en utilisant criblage à haut débit

L’objectif global de cette procédure est d’identifier les kinases qui phosphorylent un substrat d’intérêt à l’aide de méthodes de criblage à haut débit. Ceci est accompli en transectant d’abord des cellules avec des plasmides exprimant des kinases FU en glutathion sous forme de transférase ou GST. La deuxième étape consiste à effectuer un tirage de la kinase GST.

Ensuite, les échantillons sont chargés dans des gels, qui sont ensuite analysés et colorés avec un colorant bleu brillant kumasi. La dernière étape consiste à sécher les gels et à les exposer à un film d’autoradiographie. En fin de compte, en développant et en interprétant les films résultants, on est en mesure d’identifier les paires de substrats de kinase, car chaque voie est représentative d’un dosage de kinase distinct.